Hvordan fungerer bakteriel endotoksinetest?
Bakteriel endotoxin-test involverer typisk anvendelsen af reagenser, der, når de blandes i en opløsning med en mulig kontaminant, forårsager en reaktion, hvilket betyder tilstedeværelsen af en endotoksin. Kromogen testning, gelkoaguleringstest og turbidimetrisk test er de metoder, som videnskabsmænd ofte anvender til bakteriel endotoksinetest. Teknikere bruger disse evalueringsmetoder på en række stoffer og genstande, når de kontrollerer for endotoksinforurening. Vand, de råvarer, der bruges til fremstilling af medicin, udstyr og emballering, skal alle overholde endotoksinstandarder.
Bakterier, svampe og vira har alle beskyttende udvendige membraner bestående af lipopolysaccharider, også benævnt LPS. Lipiddelen af disse kæder indeholder endotoksiner. Disse stoffer forbliver generelt inden i membranen, men frigives under processen med celledeling og under cellulær ødelæggelse eller lysering. Hos mennesker forårsager disse stoffer feber, unormal koagulation, septisk chok og andre symptomer, selvom endotoksiner i modsætning til eksotoksiner i cellen ikke omdannes til et toksoid. Generelt kontrollerer mikrobiologer for tilstedeværelsen af endotoksiner, der er forbundet med forskellige gramnegative bakterier, inklusive E. coli .
Gel-koagulatestest, eller Limulus ameboecytlysat (LAL) assay, involverer anvendelse af et membranødelæggende kemikalie afledt fra amoebocytterne af hesteskoekrabben, også benævnt Limulus polyphemus. Teknikere observerer en positiv indikation af endotoksiner, hvis koagulation eller gelering forekommer, når lysatet udsættes for det pågældende objekt eller stof. Mikrobiologer bruger typisk denne metode til endotoksinetest af bakterier i forbindelse med kromogen og turbidimetrisk test for at afslutte resultater.
Kromogen bakteriel endotoksinetest bruger en specielt behandlet LAL. Når dette lysat kommer i kontakt med en endotoksin, frembringer reaktionen en specifik farve. Den endelige testproces inkluderer måling af opløsningens uklarhed eller uklarhed. Teknikere udsætter den opløsning, der er dannet i gelkoagulatestesten, for et spektrofotometer, der udsender en lysstråle. Ved at måle tabet af lysintensitet i strålen, når den passerer gennem opløsningen, kan mikrobiologer bestemme, om der er et endotoksin eller ikke.
Lab-medarbejdere gennemfører generelt disse tre bakterielle endotoksinetest to eller tre gange for at sikre nøjagtige resultater. Gel-testen bruges ikke udelukkende, da dens laveste detektionsgrænse er 0,03 Ehrlich-enheder pr. Ml (EU / ml). Kromogen og turbidimetrisk test detekterer endotoksiner i området 0,005 EU / ml. Sikkerhedsparametre varierer meget afhængigt af det stof, der testes. Mens sterilt vand anvendt til injektions- eller kunstvandingsformål ikke kan indeholde mere end 0,25 EU / ml, kan sterilt vand til inhalationsformål indeholde op til 0,5 EU / ml.