Hvad er trinnene i ELISA-proceduren?
ELISA-proceduren begynder i klinikken, hvor der udtages en blodprøve fra patienten. Et antal trin følges derefter ved hjælp af ELISA-testkit i laboratoriet. Testen vil detektere tilstedeværelsen af antistoffer eller antigener mod en sygdom, såsom HIV, i blodet. Trinene inkluderer tilsætning af forskellige stoffer og vask, og resultater måles generelt ved en farveændring.
Det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA), der også benævnes enzymimmunoassayet (EIA), anvendes som en diagnostisk test. Det er mest kendt som en diagnostisk test for HIV. Testpladen består sædvanligvis af 96 små brønde, i hvilke et specifikt antigen er immobiliseret. Hvis antistoffet er til stede i serumprøven, vil det binde til antigenet, hvilket tillader detektion via de forskellige trin i ELISA-proceduren.
Det første trin i ELISA-proceduren er at få en prøve fra patienten. Dette gøres af en sygeplejerske under sterile forhold. Blodet tages normalt fra en blodåre i armen eller hånden. En turnetter placeres på armen for at kvælde vene og gøre proceduren lettere, og huden rengøres, hvor nålen indsættes. En lille prik kan mærkes, når nålen går ind, og blodet opsamles i et sterilt rør.
Når blodprøven er taget, overføres den til laboratoriet, hvor resten af ELISA-proceduren vil blive udført af en laboratorietekniker. Blodprøven sættes først til brøndene på ELISA-pladen. Hvis det specifikke antistof er til stede, binder det sig til antigenet. Pladen vaskes derefter ved hjælp af en puffer til fjernelse af ubundne antistoffer.
Derefter tilsættes et andet antistof, normalt af animalsk oprindelse, som har et enzym, der er knyttet til det, hvilket vil binde til antistof-antigen-komplekset. Pladen vaskes igen for at fjerne overskydende. Enzymet er farvereaktivt, når der tilsættes et substrat i slutningen af ELISA-proceduren. Det er målingen af graden af farveændring, der giver resultatet.
ELISA-proceduren skal følges omhyggeligt for at undgå falske resultater. I de fleste ELISA-plader er en positiv og negativ kontrol inkluderet for at minimere sådanne falske resultater. Når man tester for HIV, følges et positivt resultat normalt op af en anden, bekræftende test, ofte af en anden type, såsom en Western Blot.