Hvad er ELISA-detektion?
En enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) er en test udført i et immunologilaboratorium for at bestemme niveauer af protein i en biologisk prøve. ELISA-detektion henviser til det sidste trin i testen, hvor en klar opløsning eller substrat sættes til en plastikplade indeholdende bundet enzymmærket antistof. Enzymet spalter underlaget, og der forekommer en farveændring. Lysabsorbering af den endelige farvede opløsning måles derefter på en ELISA-pladelæser eller spektrofotometer.
Der er forskellige typer ELISA-tests, hvor de to mest almindelige er den indirekte ELISA og indfangning eller sandwich ELISA. Den indirekte ELISA bruges til at detektere et protein, kendt som et antistof, i en patients serum. Et eksempel på en indirekte ELISA-test er den humane immundefektvirus (HIV) -test, der anvendes til at påvise antistoffer mod HIV. Sandwich ELISA-test detekterer et protein eller antigen ved at fange det mellem to antistoffer. Påvisning af hormonet human chorionic gonadotropin (hCG), som er forhøjet under graviditet, udføres med en sandwich-ELISA-test.
Begge test har et ELISA-detektionstrin i slutningen af analysen. Dette trin involverer tilsætning af et antistof, der har et enzymmolekyle knyttet til det. Efter tilsætningen af det enzymmærkede antistof tilsættes en farveløs opløsning, der indeholder det substratmolekyle, der er specifikt for det enzym. Enzymet spalter substratmolekylet, og opløsningen ændrer farve afhængigt af den anvendte kombination. Bestemmelse af mængden af antistof eller antigen i patientprøven udføres ved at måle intensiteten af farveændringen.
Der er adskillige enzymsubstratkombinationer tilgængelige til brug i ELISA-påvisningstrinnet. Det mest almindelige enzym er peberrodsperoxidase (HRP), der kan spalte underlagsmolekylerne ortho-phenylendiamindihydrochlorid (OPD) og tetramethylbenzidin (TMB). Spaltning af både OPD og TMB resulterer i en gul farve, og den optiske densitet eller absorbans af lys fra disse substrater måles af en ELISA-pladelæser. Lysabsorberingen af OPD måles ved en bølgelængde på 490 nanometer (nm), mens TMB måles ved 450 nm.
Et andet almindeligt enzym anvendt i ELISA-påvisningstrinnet er alkalisk phosphatase. Dette enzym anvendes sammen med underlaget p-nitrophenylphosphat (PNPP) og producerer også en gul opløsning. PNPP absorberer lys ved en bølgelængde på 405 nm.
Valg af enzymunderlagskombinationer er normalt baseret på hvilke enzymmærkede antistoffer, der er kommercielt tilgængelige, samt hvilket udstyr der vil blive brugt til at måle lysabsorbering. De mange kombinationer, der er tilgængelige til ELISA-detektion, gør ELISA-testen meget alsidig. Det er et vigtigt redskab i sygdomsafprøvning og forskningslaboratorier.