Hvad er ELISA-protokol?
En enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) er en almindelig test, der bruges i immunologi til at påvise antigener eller antistoffer. Antigener provokerer en immunsystemreaktion - med andre ord, de forårsager sygdomme. ELISA bruges til at påvise mange bakterielle og virale antigener, herunder humant immundefektvirus (HIV), malaria, kolera, mæslinger og fåresyge. En lidt anden ELISA-protokol kan bruges til at detektere antistoffer mod disse og mange andre patogener. En ELISA-protokol er den trinvise procedure til udførelse af en specifik ELISA.
Selvom ELISA-protokollen varierer en smule, afhængigt af typen af ELISA, der udføres, er det grundlæggende koncept det samme for dem alle. ELISA afhænger af enzymbundne antistoffer, også kaldet antiglobuliner . Et signalmolekyle bundet til disse antiglobuliner får et substrat, der er tilføjet under assayet, til at ændre farve, hvis det ønskede antigen eller antistof er til stede. Mængden af antigen eller antistof, der er til stede, er proportional med mængden af farveændring, der kan måles med en elektronisk pladelæser.
Der er tre hovedtyper af ELISA. En direkte ELISA bruges normalt til at detektere antigener snarere end antistoffer. Dette er den enkleste ELISA-protokol, da det enzymbundne antistof binder direkte til det ønskede antigen. Substrat tilsættes derefter for at bestemme mængden af til stede antigen.
En indirekte ELISA bruges til at detektere antistoffer, mens en anden type indirekte ELISA - kaldet en sandwich ELISA - kan bruges til at detektere antigener. En sandwich-ELISA-protokol kræver to antistoffer, kaldet indfangnings- og detektionsantistoffer, for at binde til det ønskede antigen. Der tilsættes et antiglobulin, der binder til detektionsantistoffet, og substratet tilsættes. Den indirekte ELISA følger en lignende protokol, men bruger et capture-antigen snarere end et capture-antistof for at detektere det ønskede antistof.
Konkurrencedygtig ELISA bruges ofte til at detektere antigener, der er til stede i lave koncentrationer, fordi det er et meget følsomt assay. I modsætning til de andre ELISA-protokoller bruger konkurrerende ELISA et enzymbundet antigen i stedet for et antistof og en lidt anden kvantificeringsmetode. I den sættes prøven indeholdende antigenet, der skal detekteres, og det enzymbundne antigen til et antistof, og de to antigener konkurrerer om antistofbindende steder. Når substratet tilsættes, er farveændringen større med et højere forhold mellem bundne enzymbundne antigener og bundne prøveantigener. Dette betyder, at der påvises højere farveændringer ved lavere koncentrationer af prøveantigenet, hvilket er det, der gør denne metode så følsom.