Hvad er ELISA -protokol?
Et enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) er en almindelig test, der anvendes i immunologi til at påvise antigener eller antistoffer. Antigener provokerer en immunsystemreaktion - med andre ord forårsager de sygdomme. ELISA bruges til at detektere mange bakterielle og virale antigener, herunder human immundefektvirus (HIV), malaria, kolera, mæslinger og fåresyge. En lidt anden ELISA -protokol kan bruges til at påvise antistoffer mod disse og mange andre patogener. En ELISA-protokol er den trin-for-trin-procedure til udførelse af en bestemt ELISA.
Selvom ELISA-protokollen varierer lidt, afhængigt af den type ELISA, der udføres, er det grundlæggende koncept det samme for dem alle. ELISA afhænger af enzymbundne antistoffer, også kaldet antiglobuliner . Et signalmolekyle fastgjort til disse antiglobuliner forårsager et substrat tilsat under analysen til at ændre farve, hvis det ønskede antigen eller antistof er til stede. Mængden af tilstedeværende antigen eller antistof er proportional med beløbetaf farveændring, som kan måles med en elektronisk pladelæser.
Der er tre hovedtyper af ELISA. En direkte ELISA bruges normalt til at detektere antigener snarere end antistoffer. Dette er den enkleste ELISA-protokol, da det enzymbundne antistof binder direkte til det ønskede antigen. Substrat tilsættes derefter for at bestemme mængden af tilstedeværende antigen.
En indirekte ELISA bruges til at detektere antistoffer, mens en anden type indirekte ELISA - kaldet en sandwich ELISA - kan bruges til at detektere antigener. En sandwich ELISA -protokol kræver to antistoffer, kaldet indfangning og detektionsantistoffer, for at binde til det ønskede antigen. Et antiglobulin tilsættes, som binder til detektionsantistoffet, og underlaget tilsættes. Den indirekte ELISA følger en lignende protokol, men bruger et fangstantigen snarere end et indfangningsantistof for at detektere DEsired antistof.
Konkurrencedygtige ELISA bruges ofte til påvisning af antigener, der er til stede i lave koncentrationer, fordi det er et meget følsomt assay. I modsætning til de andre ELISA-protokoller bruger konkurrencedygtig ELISA et enzymbundet antigen i stedet for et antistof og en lidt anden kvantificeringsmetode. I den tilsættes prøven indeholdende det antigen, der skal detekteres, og det enzymbundne antigen tilsættes begge til et antistof, og de to antigener konkurrerer om antistofbindende steder. Når substratet tilsættes, er farveændringen større, med et højere forhold mellem bundne enzymbundne antigener til bundne prøveantigener. Dette betyder, at højere farveændring detekteres i lavere koncentrationer af prøvenantigenet, hvilket er det, der gør denne metode så følsom.