Wie funktioniert der Test auf bakterielle Endotoxine?
Bei der Prüfung auf bakterielles Endotoxin werden in der Regel Reagenzien verwendet, die, wenn sie in einer Lösung mit einem möglichen Kontaminanten gemischt werden, eine Reaktion auslösen, die das Vorhandensein eines Endotoxins anzeigt. Chromogenetische Tests, Gel-Gerinnsel-Tests und turbidimetrische Tests sind die Methoden, die Wissenschaftler üblicherweise für Endotoxin-Tests von Bakterien anwenden. Die Techniker verwenden diese Bewertungsmethoden bei einer Vielzahl von Substanzen und Objekten, um die Endotoxin-Kontamination zu überprüfen. Wasser, die Rohstoffe für die Herstellung von Medikamenten, Geräten und Verpackungen, müssen alle Endotoxinstandards erfüllen.
Bakterien, Pilze und Viren weisen alle schützende äußere Membranen auf, die aus Lipopolysacchariden bestehen, die auch als LPS bezeichnet werden. Der Lipidteil dieser Ketten enthält Endotoxine. Diese Substanzen verbleiben im Allgemeinen in der Membran, werden jedoch während des Zellteilungsprozesses und während der Zerstörung oder Lyse der Zellen freigesetzt. Beim Menschen verursachen diese Substanzen Fieber, abnormale Gerinnung, septischen Schock und andere Symptome, obwohl sich Endotoxine im Gegensatz zu Exotoxinen in der Zelle nicht in ein Toxoid umwandeln. Im Allgemeinen überprüfen Mikrobiologen das Vorhandensein von Endotoxinen, die mit verschiedenen gramnegativen Bakterien, einschließlich E. coli, assoziiert sind.
Der Gel-Gerinnsel-Test oder Limulus Ameboecyte Lysate (LAL) -Test beinhaltet die Verwendung einer membranzerstörenden Chemikalie, die aus den Amöbozyten der Pfeilschwanzkrebse stammt und auch als Limulus Polyphemus bezeichnet wird. Techniker beobachten einen positiven Hinweis auf Endotoxine, wenn es zu einer Gerinnung oder Gelbildung kommt, wenn das Lysat dem fraglichen Gegenstand oder der fraglichen Substanz ausgesetzt wird. Mikrobiologen verwenden diese Methode zum Testen des bakteriellen Endotoxins typischerweise in Verbindung mit chromogenen und turbidimetrischen Tests, um schlüssige Ergebnisse zu erzielen.
Bei der Prüfung des chromogenen bakteriellen Endotoxins wird eine speziell behandelte LAL verwendet. Wenn dieses Lysat mit einem Endotoxin in Kontakt kommt, erzeugt die Reaktion eine spezifische Farbe. Der abschließende Testprozess umfasst das Messen der Trübung oder Trübung der Lösung. Die Techniker setzen die im Gel-Gerinnsel-Test gebildete Lösung einem Spektrophotometer aus, das einen Lichtstrahl aussendet. Durch Messung des Lichtintensitätsverlusts im Strahl, der die Lösung passiert, können Mikrobiologen feststellen, ob ein Endotoxin vorhanden ist oder nicht.
Labormitarbeiter führen diese drei bakteriellen Endotoxintests im Allgemeinen zwei- oder dreimal durch, um genaue Ergebnisse zu gewährleisten. Der Geltest wird nicht ausschließlich verwendet, da seine niedrigste Nachweisgrenze 0,03 Ehrlich-Einheiten pro Milliliter (EU / ml) beträgt. Chromogene und turbidimetrische Tests weisen Endotoxine im Bereich von 0,005 EU / ml nach. Die Sicherheitsparameter unterscheiden sich je nach zu prüfender Substanz erheblich. Während steriles Wasser für Injektions- oder Spülzwecke nicht mehr als 0,25 EU / ml enthalten darf, kann steriles Wasser für Inhalationszwecke bis zu 0,5 EU / ml enthalten.