Was ist ein Molekulargewichtsmarker?
Ein Molekulargewichtsmarker ist ein Molekül, das verwendet wird, um eine Abschätzung der Größe von Molekülen zu liefern, die einer Gelelektrophorese unterzogen werden. Dies ist eine Technik, bei der DNA, RNA oder Proteine unter Verwendung eines elektrischen Stroms auf einem Gel nach Größe getrennt werden. Dieser Begriff sollte nicht mit molekularen Markern in der Genetik verwechselt werden - Bereichen, in denen sich die DNA eines Organismus vom Rest der Bevölkerung unterscheidet und mit einer DNA-Sonde identifiziert werden kann.
Proteinmolekulargewichtsmarker werden üblicherweise verwendet, wenn Proteine durch Gelelektrophorese getrennt werden. Der Molekulargewichtsmarker ist eine Gruppe von Proteinen mit bekanntem Molekulargewicht, die im Allgemeinen von Biotechnologieunternehmen in einem bestimmten Größenbereich bereitgestellt werden. Man wählt den Größenbereich basierend auf den untersuchten Proben. Die Molekulargewichtsmarker werden zusammen geladen und während des Laufs abgetrennt. Durch Messen der von den Markern zurückgelegten Entfernung und des interessierenden Proteins kann die Größe des experimentellen Proteins bestimmt werden.
Verschiedene Arten von Markern können auf unterschiedliche Weise visualisiert werden. Einige der molekularen Marker sind nicht markiert und mit den restlichen Proteinen im Gel gefärbt. Sie sind erst sichtbar, wenn das gesamte Gel gefärbt ist. Andere Arten von Proteinmolekülmarkern sind mit Farben vorgefärbt, und jede Art von Protein hat eine andere Farbe. Die Trennung ist sichtbar, während das Gel läuft.
Ein Vorteil eines vorgefärbten Molekulargewichtsmarkers ist für Western Blots. Dies ist eine Technik, bei der die Proteine auf eine Membran übertragen und dann mit Antikörpern gefärbt werden, um ein bestimmtes Protein nachzuweisen. Wenn Sie farbige Marker haben, können Sie feststellen, ob der Transfer der Proteine abgeschlossen ist, bevor Sie mit dem Rest des Verfahrens fortfahren.
Molekulargewichtsmarker werden üblicherweise zur Analyse von DNA auf Gelen verwendet. Häufig werden DNA-Molekülmarker aus dem Bakterienvirus Lambda hergestellt . Restriktionsenzyme werden von Bakterien hergestellt, um die DNA von eindringenden Organismen zu verdauen, und das Restriktionsenzym HindIII wird häufig zum Abbau der Lambda-DNA verwendet. Es produziert eine Reihe von unterschiedlich großen, reproduzierbaren Fragmenten, die als DNA-Leiter bekannt sind . Durch Vergleich der von den Standards zurückgelegten Distanz auf einer logarithmischen Skala kann die Größe der zu analysierenden DNA-Fragmente bestimmt werden.
Dieser DNA-Molekulargewichtsmarker kann verwendet werden, um die Größe der DNA zu analysieren, die während der Isolierung von Genen und in gentechnischen Experimenten erzeugt wird. Es kann auch während der Polymerasekettenreaktion (PCR) verwendet werden, bei der kleine Mengen an DNA oder RNA amplifiziert werden, um große Mengen an Produkt zu produzieren. PCR-Techniken werden häufig mit Vaterschaftstests und forensischen Untersuchungen in Verbindung gebracht, sind jedoch auch in der medizinischen und biologischen Grundlagenforschung weit verbreitet. Für kleinere Produkte, die aus bestimmten Arten von PCR- oder kleinen RNA-Molekülen hergestellt wurden, sind spezielle Molekulargewichtsmarker erhältlich.