¿Cómo funciona la prueba de endotoxina bacteriana?
La prueba de endotoxina bacteriana generalmente implica el uso de reactivos que, cuando se mezclan en una solución con un posible contaminante, causan una reacción, lo que significa la presencia de una endotoxina. Pruebas cromogénicas, la prueba de coágulo de gel y las pruebas turbidimétricas son los métodos que los científicos emplean comúnmente para las pruebas de endotoxina bacteriana. Los técnicos utilizan estos métodos de evaluación en una variedad de sustancias y objetos al verificar la contaminación de endotoxinas. El agua, las materias primas utilizadas para fabricar medicamentos, equipos y envases deben pasar los estándares de endotoxina.
bacterias, hongos y virus tienen membranas exteriores protectoras que consisten en lipopolisacáridos, también denominados LPS. La porción lipídica de estas cadenas contiene endotoxinas. Estas sustancias generalmente permanecen dentro de la membrana, pero se liberan durante el proceso de división celular y durante la destrucción o lisis celular. En humanos, estas sustancias causan fiebre, coagulación anormal, shock séptico y otros síntomasOMS, aunque a diferencia de las exotoxinas dentro de la célula, las endotoxinas no se convierten en un toxoide. En general, los microbiólogos verifican la presencia de endotoxinas asociadas con varias bacterias gramnegativas, incluidas e. coli .
La prueba de coágulo de gel, o el ensayo de lisado de ameboecyte (LAL) de Limulus, implica el uso de un químico que destruye la membrana derivado de los amebocitos de los amebocitos de las cañones de herradura, también se refieren como limulus piclemus. los técnicos observan una indicación positiva de la intermedia de endoto o que ocurren el lente de los lentes. objeto o sustancia en cuestión. Los microbiólogos generalmente usan este método de prueba de endotoxina bacteriana junto con pruebas cromogénicas y turbidimétricas para obtener resultados concluyentes.
Prueba de endotoxina bacteriana cromogénica utiliza un LAL especialmente tratado. Cuando este lisado contacta con una endotoxina, la reacción produce un color específico. El proceso de prueba final incluye medir la turbidez o la nubosidad de la solución. Los técnicos exponen la solución formada en la prueba de coágulo de gel a un espectrofotómetro, que emite un haz de luz. Al medir la pérdida de la intensidad de la luz en el haz a medida que pasa a través de la solución, los microbiólogos pueden determinar si hay o no una endotoxina.
Los asociados de laboratorio generalmente completan estas tres pruebas de endotoxina bacteriana dos o tres veces para garantizar resultados precisos. La prueba de gel no se usa exclusivamente, ya que su límite más bajo de detección es 0.03 unidades ehrlich por mililitro (EU/ml). Las pruebas cromogénicas y turbidimétricas detectan endotoxinas en el rango de 0.005 EU/ml. Los parámetros de seguridad difieren enormemente dependiendo de la sustancia que se está probando. Mientras que el agua estéril utilizada para fines de inyección o riego no puede contener más de 0.25 EU/ml, el agua estéril para fines de inhalación puede contener hasta 0.5 EU/ml.