¿Cuáles son los pasos en el procedimiento ELISA?
El procedimiento ELISA comienza en la clínica, con una muestra de sangre que se toma del paciente. Luego se siguen varios pasos utilizando el kit de prueba ELISA en el laboratorio. La prueba detectará la presencia de anticuerpos o antígenos contra una enfermedad, como el VIH, en la sangre. Los pasos incluyen la adición de varias sustancias y el lavado y los resultados generalmente se miden mediante un cambio de color.
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), que también se conoce como inmunoensayo enzimático (EIA), se utiliza como prueba de diagnóstico. Es más conocido como una prueba de diagnóstico para el VIH. La placa de prueba generalmente consta de 96 pocillos pequeños en los que se inmoviliza un antígeno específico. Si el anticuerpo está presente en la muestra de suero, se unirá al antígeno, permitiendo la detección a través de los diversos pasos del procedimiento ELISA.
El primer paso en el procedimiento ELISA es obtener una muestra del paciente. Esto lo hace una enfermera, en condiciones estériles. La sangre generalmente se toma de una vena en el brazo o la mano. Se coloca un torniquete en el brazo para hinchar la vena y facilitar el procedimiento, y se limpia la piel donde se insertará la aguja. Se puede sentir un pequeño pinchazo a medida que la aguja entra y la sangre se recogerá en un tubo estéril.
Después de tomar la muestra de sangre, se transfiere al laboratorio donde el resto del procedimiento de ELISA será realizado por un técnico de laboratorio. La muestra de sangre se agrega primero a los pocillos de la placa ELISA. Si el anticuerpo específico está presente, se une al antígeno. Luego se lava la placa, usando un tampón, para eliminar los anticuerpos no unidos.
Luego se agrega un segundo anticuerpo, normalmente de origen animal, que tiene una enzima unida a él, que se unirá al complejo anticuerpo-antígeno. La placa se lava nuevamente para eliminar el exceso. La enzima reacciona con el color cuando se agrega un sustrato al final del procedimiento ELISA. Es la medida del grado de cambio de color que da el resultado.
El procedimiento ELISA debe seguirse cuidadosamente para evitar resultados falsos. En la mayoría de las placas ELISA se incluye un control positivo y negativo, para minimizar tales resultados falsos. Cuando se realiza una prueba de VIH, un resultado positivo generalmente será seguido por una segunda prueba confirmatoria, a menudo de un tipo diferente, como una Western Blot.