¿Qué es un anticuerpo de biotina?
Contrariamente a lo que uno podría pensar primero, un anticuerpo de biotina no es una sustancia que se plantea contra la biotina. Más bien, un anticuerpo de biotina es un anticuerpo que se ha conjugado a biotina. La biotina se une fuertemente a un ligando, avidina, que, a su vez, puede conjugar con moléculas detectables con luz como los fluoróforos. La biotina y la avidina forman uno de los enlaces covalentes biológicamente más fuertes conocidos, lo que hace que las unidades/receptores conjugadas con biotina y avidina sean especialmente útiles en estudios científicos.
biotina es una vitamina de complejo B-vitamina B7. Es una molécula tan pequeña que múltiples moléculas de biotina pueden conjugarse con un solo anticuerpo monoclonal o policlonal. El hecho de que la biotina también sea soluble en agua permite una mayor versatilidad en los sistemas de amortiguación que si fuera insoluble. Para una mayor especificidad, la conjugación de anticuerpos monoclonales con la biotina a menudo se recomienda sobre la conjugación de anticuerpos policlonales. La molécula de biotina puede ser directamente boSe encuentra con el anticuerpo de interés, o se puede vincular a través de una cola molecular para permitir más libertad de movimiento.
El ligando biotina avidina se encuentra en la albúmina de huevo. Se puede hacer y aislar a bajo precio. Múltiples moléculas de avidina se unirán a cada receptor de biotina, amplificando una sola señal de detección de anticuerpos. Cuando un anticuerpo de biotina se adhiere a un antígeno de interés, un experimentador puede exponer el complejo a la avidina conjugada con fluoróforos, lo que hace que el complejo sea detectable. A través de imágenes fluorescentes, el anticuerpo de biotina y el ligando conjugado con avidina se pueden detectar con microscopía óptica, y los antígenos de interés se pueden estudiar in situ .
.Aunque la creación y el uso de un anticuerpo de biotina y una molécula de avidina etiquetada con fluorescencia es una solución común para la detección de antígenos, existen alternativas que aún utilizan el complejo de biotina/avidina. Biotina vinculante a unEl ligando, como una neurotoxina, puede ser ventajosa para detectar la colocación de receptores neuronales afectados por la neurotoxina en cuestión. También es posible conjugarse con biotina a una secuencia de nucleótidos, como el ácido ribonucleico mensajero (ARNm) para encontrar dónde se traducen estas secuencias de nucleótidos en proteínas o para detectar la regulación del ARNm celular.
Es posible comprar anticuerpos policlonales o monoclonales biotinilados, aunque la producción de anticuerpos biotinilados está dentro de la capacidad de muchos experimentadores. Los protocolos se pueden encontrar en línea que sugieren métodos de biotinilación de anticuerpos, aunque los protocolos más fáciles de fácilmente seguidos vinculan directamente la biotina con un anticuerpo en lugar de sugerir cómo intercalar un espaciador molecular. Los espaciadores moleculares entre la biotina y su anticuerpo asociado permiten un mayor espaciado para exponer más moléculas a los sitios de unión, y estos anticuerpos de biotina generalmente se compran en lugar de hacer.