¿Qué es un ensayo de ubiquitinación?
La ubiquitinación se refiere a la unión de la proteína ubiquitina a otras proteínas por tres enzimas diferentes. Un ensayo de ubiquitinación es una prueba que determina cuánto de este proceso ocurre dentro de la célula. Las pruebas se pueden usar para determinar cómo las diferentes condiciones afectan la unión a proteínas, los pasos y las estructuras que son importantes en la vía de ubiquitinación y la cantidad de proteína en la célula. Cantidades inadecuadas o excesivas se han relacionado con el desarrollo de muchas enfermedades diferentes.
Una proteína que se encuentra en las células, la función de la ubiquitina es unirse a las proteínas mientras funciona como una "etiqueta" o señal a otras estructuras. Esta "etiqueta" le indica a las enzimas que sepan que la proteína puede destruirse, reciclarse o moverse. El resultado es la destrucción o el transporte de proteínas.
Estas proteínas marcadoras son importantes para la reparación del ADN, las infecciones virales y la respuesta inmune. Otras funciones importantes incluyen roles en la muerte celular, división celular y desarrollo de células. Demasiada ubiquitina, o falta de ella, puede desempeñar un papel en la formación de muchas enfermedades, como el cáncer, los trastornos genéticos y las enfermedades del sistema inmunitario.
Los investigadores utilizarán un ensayo de ubiquitinación para tratar de determinar qué condiciones alteran la concentración de la proteína en la célula y comparar las células enfermas con las células sanas. Los científicos también lo usan para investigar qué condiciones causarán cambios en la unión. Además, pueden intentar vincular un código de ADN específico con la cantidad de enzimas en la célula.
Hay más de un tipo de ensayo de ubiquitinación que los científicos de investigación utilizan específicamente. Se determinará el porcentaje de proteínas que se unen a la ubiquintina. Otro examina la actividad de las enzimas o la presencia de cualquier otro intermediario que se encuentre en la vía de ubiquinación. Se desarrollan diferentes ensayos basados en la proteína objetivo a la que se unirá la ubiquitina.
La base de un ensayo de ubiquitinación es incorporar un compuesto que se marca usando otro químico fácilmente medible. En los ensayos de oncología, la ubiquitina puede marcarse con criptato, un compuesto que contiene dos átomos de nitrógeno. Esto se puede usar para determinar qué enzima es más activa en la célula.
Un ensayo de ubiquitinación tendrá dos pasos. El primero es un paso enzimático donde las enzimas unirán la ubiquitina marcada a la proteína objetivo. El segundo es un paso de detección en el que se examina la unión de la proteína objetivo usando un conjugado como un anticuerpo. El anticuerpo emitirá fluorescencia o cambiará de color, lo que le permite al investigador determinar la actividad de las enzimas.