¿Qué es un ensayo de ubiquitinación?
ubiquitinación se refiere a la unión de la proteína ubiquitina a otras proteínas por tres enzimas diferentes. Un ensayo de ubiquitinación es una prueba que determina cuánto de este proceso ocurre dentro de la célula. Las pruebas se pueden utilizar para determinar cómo las diferentes condiciones afectan la unión de proteínas, los pasos y las estructuras que son importantes en la vía de ubiquitinnation y la cantidad de proteína en la célula. Las cantidades inadecuadas o sobreabundantes se han relacionado con el desarrollo de muchas enfermedades diferentes.
A proteína encontrada en las células, la función de la ubiquitina es unirse a las proteínas mientras funciona como una "etiqueta" o señal a otras estructuras. Esta "etiqueta" señala enzimas para saber que la proteína puede ser destruida, reciclada o movida. El resultado es la destrucción o transporte de proteínas.
Estas proteínas de etiquetado son importantes para la reparación del ADN, las infecciones virales y la respuesta inmune. Otras funciones importantes incluyen roles en la muerte celular, la división celular y el desarrollo de células. Demasiado muLa ch ubiquitina, o la falta de ella, puede desempeñar un papel en la formación de muchas enfermedades, como el cáncer, los trastornos genéticos y las enfermedades del sistema inmune.
Los investigadores utilizarán un ensayo de ubiquitinación para tratar de determinar qué condiciones alteran la concentración de la proteína en la célula y compararán las células enfermas con células sanas. Los científicos también lo usan para investigar qué condiciones causarán cambios en la unión. Además, pueden intentar vincular el código de ADN específico con la cantidad de enzimas en la célula.
Hay más de un tipo de ensayo de ubiquitinación que los científicos de investigación usan específicamente. Uno determinará el porcentaje de proteínas que están unidas con ubiquintina. Otro examina la actividad de las enzimas o la presencia de cualquier otro intermediario encontrado en la vía de ubiquinación. Se desarrollan diferentes ensayos en función de la proteína objetivo a la que se unirá la ubiquitina.
La base de un ensayo de ubiquitinación es incorporar un compuesto que esté etiquetado utilizando otro químico fácilmente medido. En los ensayos de oncología, la ubiquitina se puede etiquetar con cripto, un compuesto que contiene dos átomos de nitrógeno. Esto se puede usar para determinar qué enzima es más activa en la célula.
Un ensayo de ubiquitinación tendrá dos pasos. El primero es un paso enzimático donde las enzimas se unirán a la ubiquitina marcada a la proteína objetivo. El segundo es un paso de detección en el que se examina la unión de la proteína objetivo utilizando un conjugado como un anticuerpo. El anticuerpo fluorescará o cambiará de color, lo que luego le permite al investigador determinar la actividad de las enzimas.