¿Qué es la secuenciación de bisulfito?
La secuenciación de bisulfito
es un método en el que se analizan diferentes regiones de ADN utilizando metilación. La metilación es el proceso de agregar una molécula específica, llamada grupo metilo, a un nucleótido, en este caso generalmente una citosina. Los nucleótidos inactivos a menudo se metilan, por lo que este método puede usarse para una variedad de propósitos, desde determinar las regiones activas de un genoma hasta identificar regiones ricas en genes. En la secuenciación de bisulfito, las citosinas metiladas no se ven afectadas por el proceso de secuenciación, mientras que las citosinas no metiladas se convierten en uracilo, un nucleótido no se encuentra generalmente en el material genético, el ácido desoxirribonucleico (ADN)
Este método es muy sensible a los cambios en la metilación, por lo que los pequeños cambios en la unión pueden dar la información sobre los investigadores de los investigadores. El bisulfito de sodio convierte el citosina en uracilo, pero la conversión ocurre en un entorno donde la citosina metilada no sufrirá este cambio. Cuando se completa la secuenciación de bisulfito, el origenAL ADN se ha convertido en una molécula significativamente diferente. Las citosinas estarán muy agotadas o potencialmente ausentes. Si todavía se encuentra una citosina en esta molécula convertida, representa una citosina metilada naturalmente en el genoma bajo consideración.
Como todos los protocolos experimentales, la secuenciación de bisulfito tiene inconvenientes. Su inconveniente más significativo es que requiere una concentración de sal muy alta para funcionar correctamente. La sal fomenta el recocido de ADN monocatenario en su doble hélice más natural, y el bisulfito de sodio no siempre puede alcanzar las citosinas cuando son parte del ADN de doble cadena. Si la concentración de sal es demasiado alta, una serie de citosinas pueden no convertirse en uracilo, lo que resulta en una identificación falsa de citosinas metiladas dentro de un genoma. Los agentes desnaturalizantes pueden ser necesarios para minimizar el número de identificaciones falsas positivas.
gran amoLas UNT de datos genómicos no son necesarios para la secuenciación de bisulfito, por lo que el método tiene una aplicación útil que analiza muestras clínicas. La fuente de ácido nucleico original no importa, pero la fuente debe ser ADN. En teoría, el ácido ribonucleico (ARN) podría secuenciarse utilizando este método, ya que la mayoría de los ARN son varados y no serían tan susceptibles a los falsos positivos debido a los nucleótidos bloqueados. Sin embargo, cuando se pone en práctica, la secuenciación de bisulfito no es útil para el ARN, porque el ARN naturalmente tiene uracilo. Sin algún tipo de marcado externo o adición al protocolo, las citosinas convertidas serían indistinguibles del uracilo natural.
Al realizar cualquier tipo de metodología de secuenciación, la precisión y la precisión son esenciales. Los métodos sensibles como la secuenciación de bisulfito ofrecen un medio confiable de análisis de secuencia, lo que a su vez permite el análisis génico e identificación de objetivos para fármacos y terapias. Aunque este método no se puede usar en las personas vivas, aún puede serde gran ayuda con solo las muestras de tejido más pequeñas para trabajar.