¿Qué es el protocolo Elisa?
Un ensayo inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA) es una prueba común utilizada en inmunología para detectar antígenos o anticuerpos. Los antígenos provocan una reacción del sistema inmune: en otras palabras, causan enfermedades. ELISA se usa para detectar muchos antígenos bacterianos y virales, incluido el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), la malaria, el cólera, el sarampión y las paperas. Se puede usar un protocolo ELISA ligeramente diferente para detectar anticuerpos contra estos y muchos otros patógenos. Un protocolo ELISA es el procedimiento paso a paso para realizar una ELISA específica.
Aunque el protocolo ELISA varía ligeramente, dependiendo del tipo de ELISA que se realiza, el concepto básico es el mismo para todos ellos. ELISA depende de los anticuerpos ligados a enzimas, también llamados antiglobulinas . Una molécula de señal unida a estas antiglobulinas provoca un sustrato agregado durante el ensayo para cambiar el color, si el antígeno o el anticuerpo deseado está presente. La cantidad de antígeno o anticuerpo presente es proporcional a la cantidadde cambio de color, que se puede medir con un lector de placas electrónica.
Hay tres tipos principales de ELISA. A Direct ELISA generalmente se usa para detectar antígenos en lugar de anticuerpos. Este es el protocolo ELISA más simple, ya que el anticuerpo ligado a enzimas se une directamente al antígeno deseado. Luego se agrega sustrato para determinar la cantidad de antígeno presente.
an indirecto Elisa se usa para detectar anticuerpos, mientras que otro tipo de ELISA indirecta, llamado A Sandwich ELISA, puede usarse para detectar antígenos. Un protocolo Sandwich ELISA requiere dos anticuerpos, llamados anticuerpos de captura y detección, para unirse al antígeno deseado. Se agrega una antiglobulina, que se une al anticuerpo de detección, y se agrega el sustrato. El ELISA indirecto sigue un protocolo similar, pero usa un antígeno de captura en lugar de un anticuerpo de captura para detectar el DAntibuerto esired.
competitivo Elisa a menudo se usa para detectar antígenos que están presentes en bajas concentraciones, porque es un ensayo muy sensible. A diferencia de los otros protocolos ELISA, el ELISA competitivo utiliza un antígeno ligado a enzimas en lugar de un anticuerpo y un método de cuantificación ligeramente diferente. En él, la muestra que contiene el antígeno a detectar y el antígeno ligado a la enzima se agregan a un anticuerpo, y los dos antígenos compiten por los sitios de unión a anticuerpos. Cuando se agrega el sustrato, el cambio de color es mayor, con una relación más alta de antígenos ligados a enzimas unidos a antígenos de muestra unidos. Esto significa que se detecta un mayor cambio de color a concentraciones más bajas del antígeno de muestra, que es lo que hace que este método sea tan sensible.