¿Qué es una mancha del norte?
La hibridación de transferencia Northern es una técnica que se utiliza para detectar los niveles de ARN mensajero (ARNm) en una muestra y para cuantificar la cantidad de ARNm que está presente. Aunque existen otras técnicas más poderosas, Northern Blot sigue siendo el estándar debido a su simplicidad y facilidad de uso. La técnica de transferencia Northern también permite la comparación directa de múltiples muestras en un solo experimento.
El ARN mensajero es un tipo de ácido nucleico que se produce cuando se expresa un gen. Un gen que se enciende y funcional dentro de una célula se transcribe al ARNm. El ARNm se transporta luego al citoplasma de la célula, donde se traduce a una proteína. El análisis de transferencia Northern de una muestra de ARNm celular puede proporcionar información útil sobre la matriz de proteínas que la célula está produciendo.
En una transferencia Northern, el ARNm se extrae de las células y se ejecuta a través de una electroforesis de gel de agarosa desnaturalizante, que permite que el ARNm en la muestra se separe según el tamaño. SALas MPLE de moléculas de ARNm de tamaños conocidos se ejecutan al mismo tiempo para proporcionar un control. Una vez que se completa la electroforesis, las muestras se transfieren e inmovilizan en una membrana sólida, típicamente hechas de un material como el nylon. Las muestras se exponen a sondas radiolabeladas durante varias horas antes del análisis. Durante el análisis, el ARNm que se ha hibrido a una sonda radiomarcada se puede detectar claramente usando rayos X.
La técnica de transferencia Northern permite la observación de patrones de expresión génica entre diferentes tipos de tejidos. Se puede comparar el ARN mensajero extraído de las células de diferentes tejidos y tipos de órganos, y se pueden examinar las respuestas celulares al estrés, la infección y muchos otros estímulos. Al observar las diferencias en la expresión de ARNm en diferentes condiciones, un científico puede determinar qué tipos de proteínas produce una célula en respuesta a ciertos estímulos. Esta lataProporcione pistas sobre las funciones de proteínas desconocidas, o en el caso de proteínas conocidas, información sobre las respuestas celulares a los estímulos en cuestión.
Por ejemplo, una transferencia Northern puede mostrar que la expresión de una proteína desconocida aumenta en respuesta a la presencia de una toxina específica. Entonces podría teorizar que la proteína está involucrada en la reducción de la toxicidad, tal vez transportando el químico fuera de la célula o convirtiéndola en un metabolito. Si las proteínas conocidas están bajo examen, documentar los cambios en la expresión de proteínas puede proporcionar información sobre la respuesta en sí. Si la expresión de un transportador molecular conocido se incrementó, por ejemplo, podría confirmarse que la respuesta celular a la toxina es transportar la toxina fuera de la célula.