¿Qué es un ensayo de cambio de movilidad electroforética?
Un ensayo es una prueba diseñada para separar las piezas originales de una célula en partes que son fáciles de identificar. El ensayo de cambio de movilidad electroforética es un experimento que usa electricidad para mover macromoléculas, como proteínas, a través de una matriz de gel para causar una separación entre las diferentes macromoléculas en función del tamaño. Al igual que una batería de automóvil, los extremos negativo y positivo están en lados opuestos del ensayo de cambio de movilidad electroforética o ensayo de cambio de gel. Esto hace que la electricidad atraiga las macromoléculas en función de la carga. Cada macromolécula se mueve a una velocidad diferente, ya que las más pequeñas experimentan menos interferencia del gel.
Se requieren varios pasos para configurar un ensayo de cambio de movilidad electroforética. Las macromoléculas que deben separarse deben prepararse primero. La mayoría de las macromoléculas se obtienen de células vivas y requieren procedimientos específicos. La obtención de las partes a separar a menudo requiere una centrífuga y una reacción química que descompone las células. La centrífuga hará girar un vial a alta velocidad y formará un gránulo de las macromoléculas necesarias. Esto se disuelve y, a menudo, se agrega un color u otra etiqueta para ayudar a rastrear el ensayo de cambio de gel.
El gel, a veces llamado lecho, también debe estar recién hecho de una mezcla precisa de agarosa en polvo y agua que pasa rápidamente de líquido a gel. Comúnmente, un ensayo de cambio de movilidad electroforética tendrá varios carriles para ensayos separados, que se utilizan para comparar diferentes mezclas de macromoléculas. Un carril siempre se establece como control y generalmente solo tiene un tipo de macromolécula.
La fuente de alimentación debe seleccionarse cuidadosamente y no está conectada hasta que todo esté listo. La cantidad de tiempo que la energía está encendida determina el cambio de movilidad de las macromoléculas. Es importante separar las piezas lo suficiente para un análisis adecuado. Si el poder no se sincroniza correctamente, las comparaciones futuras también serán inexactas. La dirección de las macromoléculas estará determinada por la carga que posean naturalmente, la mayoría se mueve hacia el extremo negativo.
Las pruebas genéticas simples y los análisis de proteínas se realizan comúnmente con un ensayo de cambio de movilidad electroforética. Esto se muestra por diferentes turnos en diferentes carriles. Si ocurre una interacción, las macromoléculas se combinan y corren más lentamente a través de la matriz en comparación con el carril de control con solo una macromolécula. Los ensayos de cambio de gel se utilizan para eliminar o confirmar rápidamente los resultados genéticos que los métodos complicados podrían tardar más en completarse. También pueden determinar si los anticuerpos, una macromolécula del sistema inmune, se adhieren a las proteínas que se pueden usar para combatir las bacterias y los virus.