Qu'est-ce qu'un test d'ubiquitination?
L'ubiquitination fait référence à la liaison de l'ubiquitine protéique à d'autres protéines par trois enzymes différentes.Un test d'ubiquitination est un test qui détermine la quantité de ce processus dans la cellule.Les tests peuvent être utilisés pour déterminer comment les différentes conditions affectent la liaison des protéines, les étapes et les structures qui sont importantes dans la voie d'ubiquitinnation et la quantité de protéines dans la cellule.Des quantités inadéquates ou surabondantes ont été liées au développement de nombreuses maladies différentes.
Une protéine trouvée dans les cellules, la fonction de l'ubiquitine est de se lier aux protéines tout en fonctionnant comme un étiquette ou un signal à d'autres structures.Cette balise signale ensuite des enzymes pour savoir que la protéine peut être détruite, recyclée ou déplacée.Le résultat est la destruction ou le transport des protéines.
Ces protéines de marquage sont importantes pour la réparation de l'ADN, les infections virales et la réponse immunitaire.D'autres fonctions importantes comprennent les rôles dans la mort cellulaire, la division cellulaire et le développement des cellules.Trop d'ubiquitine, ou son absence, peut jouer un rôle dans la formation de nombreuses maladies, telles que le cancer, les troubles génétiques et les maladies du système immunitaire.
Les chercheurs utiliseront un test d'ubiquitination pour essayer de déterminer quelles conditions modifient la concentration de la protéine dans la cellule et la comparaison des cellules malades avec des cellules saines.Les scientifiques l'utilisent également pour étudier quelles conditions entraîneront des changements dans la liaison.De plus, ils peuvent essayer de relier le code d'ADN spécifique avec la quantité d'enzymes dans la cellule.
Il existe plus d'un type de test d'ubiquitination que les chercheurs utilisent spécifiquement.On déterminera le pourcentage de protéines liées à l'ubiquine.Un autre examine l'activité des enzymes ou la présence de tout autre intermédiaire trouvé dans la voie d'ubiquination.Différents tests sont développés sur la base de la protéine cible à laquelle l'ubiquitine se liera.
La base d'un test d'ubiquitination consiste à incorporer un composé qui est marqué à l'aide d'un autre produit chimique facilement mesuré.Dans les tests en oncologie, l'ubiquitine peut être étiquetée avec le cryptate, un composé qui contient deux atomes d'azote.Cela peut être utilisé pour déterminer quelle enzyme est la plus active dans la cellule.
Un test d'ubiquitination aura deux étapes.Le premier est une étape enzymatique où les enzymes lieront l'ubiquitine marquée à la protéine cible.La seconde est une étape de détection dans laquelle la liaison de la protéine cible est examinée à l'aide d'un conjugué tel qu'un anticorps.L'anticorps fluorescera ou changera la couleur, ce qui permet ensuite au chercheur de déterminer l'activité des enzymes.