Qu'est-ce qu'un dosage d'ubiquitination?

L'ubiquitination fait référence à la liaison de la protéine ubiquitine à d'autres protéines par trois enzymes différentes. Un test d'ubiquitination est un test qui détermine la quantité de ce processus qui se produit dans la cellule. Les tests peuvent être utilisés pour déterminer comment différentes conditions affectent la liaison aux protéines, les étapes et les structures qui jouent un rôle important dans la voie de l'ubiquitination, ainsi que la quantité de protéines dans la cellule. Des quantités insuffisantes ou surabondantes ont été associées au développement de nombreuses maladies différentes.

Une protéine présente dans les cellules, la fonction de l'ubiquitine est de se lier à des protéines tout en fonctionnant comme un "marqueur" ou un signal vers d'autres structures. Cette "étiquette" signale ensuite aux enzymes que la protéine peut être détruite, recyclée ou déplacée. Le résultat est la destruction ou le transport des protéines.

Ces protéines de marquage sont importantes pour la réparation de l'ADN, les infections virales et la réponse immunitaire. Parmi les autres fonctions importantes figurent les rôles dans la mort cellulaire, la division cellulaire et le développement des cellules. Une quantité excessive ou insuffisante d'ubiquitine peut jouer un rôle dans la formation de nombreuses maladies, telles que le cancer, les troubles génétiques et les maladies du système immunitaire.

Les chercheurs utiliseront un test d'ubiquitination pour tenter de déterminer les conditions qui modifient la concentration de la protéine dans la cellule et de comparer les cellules malades aux cellules saines. Les scientifiques l'utilisent également pour rechercher les conditions susceptibles d'entraîner des modifications de la liaison. De plus, ils peuvent essayer de lier un code ADN spécifique à la quantité d'enzymes dans la cellule.

Il existe plus d'un type d'analyse d'ubiquitination que les chercheurs utilisent spécifiquement. On déterminera le pourcentage de protéines liées à l'ubiquintine. Un autre examine l'activité des enzymes ou la présence de tout autre intermédiaire trouvé dans la voie de l'ubiquination. Différents tests sont développés sur la base de la protéine cible à laquelle l'ubiquitine se liera.

La base d'un test d'ubiquitination consiste à incorporer un composé marqué à l'aide d'un autre produit chimique facilement mesurable. Dans les tests d'oncologie, l'ubiquitine peut être marquée avec le cryptate, un composé qui contient deux atomes d'azote. Ceci peut être utilisé pour déterminer quelle enzyme est la plus active dans la cellule.

Un test d'ubiquitination aura deux étapes. La première est une étape enzymatique où les enzymes vont lier l’ubiquitine marquée à la protéine cible. La seconde est une étape de détection dans laquelle la liaison de la protéine cible est examinée en utilisant un conjugué tel qu'un anticorps. L'anticorps fluorescent ou change de couleur, ce qui permet au chercheur de déterminer l'activité des enzymes.