Cos'è un test ubiquitinazione?
L'ubiquitinazione si riferisce al legame della proteina ubiquitina ad altre proteine da tre diversi enzimi.Un test di ubiquitinazione è un test che determina la quantità di questo processo all'interno della cella.I test possono essere utilizzati per determinare in che modo diverse condizioni influiscono sul legame delle proteine, passi e strutture che sono importanti nella via dell'ubiquitinnazione e la quantità di proteina nella cellula.Importi inadeguati o sovrabbondanti sono stati collegati allo sviluppo di molte malattie diverse.
Una proteina trovata nelle cellule, la funzione dell'ubiquitina è quella di legarsi alle proteine mentre funziona come un tag o un segnale ad altre strutture.Questo tag segnala quindi gli enzimi per sapere che la proteina può essere distrutta, riciclata o mossa.Il risultato è la distruzione o il trasporto di proteine.
Queste proteine di tagging sono importanti per la riparazione del DNA, le infezioni virali e la risposta immunitaria.Altre funzioni importanti includono ruoli nella morte cellulare, nella divisione cellulare e nello sviluppo delle cellule.Troppa ubiquitina, o mancanza di essa, può svolgere un ruolo nella formazione di molte malattie, come il cancro, i disturbi genetici e le malattie del sistema immunitario.
I ricercatori useranno un test ubiquitinazione per cercare di determinare quali condizioni alterano la concentrazione della proteina nella cellula e confrontando le cellule malate con cellule sane.Gli scienziati lo usano anche per indagare su quali condizioni causano cambiamenti nel vincolo.Inoltre, possono provare a collegare il codice DNA specifico con la quantità di enzimi nella cellula.
Esiste più di un tipo di test ubiquitinazione che i ricercatori usano specificamente.Si determinerà la percentuale di proteine legate all'ubiquintina.Un altro esamina l'attività degli enzimi o la presenza di qualsiasi altro intermedio presente nella via dell'ubiquazione.Diversi test sono sviluppati in base alla proteina target a cui l'ubiquitina si legarà.
La base di un test di ubiquitinazione è di incorporare un composto etichettato usando un altro chimico facilmente misurato.Nei test oncologici, l'ubiquitina può essere etichettata con criptate, un composto che contiene due atomi di azoto.Questo può essere usato per determinare quale enzima è più attivo nella cellula.
Un test di ubiquitinazione avrà due passaggi.Il primo è un passaggio enzimatico in cui gli enzimi legheranno l'ubiquitina marcata alla proteina bersaglio.Il secondo è una fase di rilevamento in cui viene esaminato il legame della proteina bersaglio usando un coniugato come un anticorpo.L'anticorpo fluorescerà o cambierà colore, che consente quindi al ricercatore di determinare l'attività degli enzimi.