Che cos'è un test di Ubiquitination?

L'ubiquitinazione si riferisce al legame della proteina ubiquitina con altre proteine ​​con tre diversi enzimi. Un test di ubiquitinazione è un test che determina la quantità di questo processo che si verifica all'interno della cellula. I test possono essere utilizzati per determinare in che modo diverse condizioni influenzano il legame con le proteine, i passaggi e le strutture importanti nel percorso di ubiquitinnazione e la quantità di proteine ​​nella cellula. Importi inadeguati o eccessivi sono stati collegati allo sviluppo di molte malattie diverse.

Una proteina presente nelle cellule, la funzione dell'ubiquitina è di legarsi alle proteine ​​mentre funziona come un "tag" o segnale ad altre strutture. Questo "tag" segnala quindi agli enzimi di sapere che la proteina può essere distrutta, riciclata o spostata. Il risultato è la distruzione o il trasporto di proteine.

Queste proteine ​​di marcatura sono importanti per la riparazione del DNA, le infezioni virali e la risposta immunitaria. Altre funzioni importanti includono ruoli nella morte cellulare, nella divisione cellulare e nello sviluppo delle cellule. Troppa ubiquitina, o la sua mancanza, può avere un ruolo nella formazione di molte malattie, come il cancro, i disturbi genetici e le malattie del sistema immunitario.

I ricercatori useranno un test di ubiquitinazione per cercare di determinare quali condizioni alterano la concentrazione della proteina nella cellula e confrontando le cellule malate con le cellule sane. Gli scienziati lo usano anche per studiare quali condizioni causeranno un cambiamento nel legame. Inoltre, possono provare a collegare il codice DNA specifico con la quantità di enzimi nella cellula.

Esiste più di un tipo di test di ubiquitinazione specificamente utilizzato dai ricercatori. Si determinerà la percentuale di proteine ​​legate all'ubiquintina. Un altro esamina l'attività degli enzimi o la presenza di altri intermedi trovati nel percorso di ubiquinazione. Vengono sviluppati diversi test basati sulla proteina target a cui si legherà l'ubiquitina.

La base di un test di ubiquitinazione è incorporare un composto che è etichettato usando un'altra sostanza chimica facilmente misurabile. Nei test oncologici, l'ubiquitina può essere etichettata con criptato, un composto che contiene due atomi di azoto. Questo può essere usato per determinare quale enzima è più attivo nella cellula.

Un test di ubiquitinazione prevede due passaggi. Il primo è un passaggio enzimatico in cui gli enzimi legheranno l'ubiquitina marcata alla proteina bersaglio. Il secondo è un passaggio di rilevamento in cui viene esaminato il legame della proteina bersaglio usando un coniugato come un anticorpo. L'anticorpo fluirà o cambierà colore, il che consentirà quindi al ricercatore di determinare l'attività degli enzimi.