Che cos'è un test di spostamento della mobilità elettroforetica?
Un test è un test progettato per separare i pezzi originali di una cella in parti facili da identificare. Il saggio di spostamento della mobilità elettroforetica è un esperimento che utilizza l'elettricità per spostare le macromolecole, come le proteine, attraverso una matrice di gel per causare una separazione tra le diverse macromolecole in base alle dimensioni. Come una batteria per auto, le estremità negativa e positiva si trovano ai lati opposti del test di spostamento della mobilità elettroforetica o del test di spostamento del gel. Questo fa sì che l'elettricità attiri le macromolecole in base alla carica. Ogni macromolecola si muove a una velocità diversa, poiché quelle più piccole subiscono meno interferenze dal gel.
Sono necessari diversi passaggi per impostare un test di spostamento della mobilità elettroforetica. Le macromolecole che devono essere separate devono essere preparate per prime. La maggior parte delle macromolecole sono ottenute da cellule viventi e richiedono procedure specifiche. Ottenere le parti da separare spesso richiede una centrifuga e una reazione chimica che distrugge le cellule. La centrifuga farà girare una fiala ad alta velocità e formerà un pellet delle macromolecole necessarie. Questo viene sciolto e spesso viene aggiunto un colore o altra etichetta per aiutare a tenere traccia del test di spostamento del gel.
Il gel, a volte chiamato il letto, deve anche essere appena fatto da una miscela precisa di agarosio in polvere e acqua che passa rapidamente da liquido a gel. Comunemente un saggio di spostamento della mobilità elettroforetica avrà diverse corsie per saggi separati, che vengono utilizzati per confrontare diverse miscele di macromolecole. Una corsia è sempre impostata come controllo e di solito ha un solo tipo di macromolecola.
La fonte di alimentazione deve essere selezionata con cura e non è collegata fino a quando tutto è pronto. Il tempo di accensione determina il cambiamento di mobilità delle macromolecole. È importante separare i pezzi abbastanza per una corretta analisi. Se la potenza non è adeguatamente cronometrata, anche i confronti futuri saranno inaccurati. La direzione delle macromolecole sarà determinata dalla carica che possiedono naturalmente - la maggior parte si sposta verso l'estremità negativa.
Semplici test genetici e analisi delle proteine vengono comunemente eseguiti con un test di spostamento della mobilità elettroforetica. Questo viene visualizzato da diversi turni in corsie diverse. Se si verifica un'interazione, le macromolecole si combinano e corrono più lentamente attraverso la matrice rispetto alla corsia di controllo con una sola macromolecola. I saggi di gel shift vengono utilizzati per eliminare rapidamente o confermare i risultati genetici che il completamento di metodi complicati potrebbe richiedere più tempo. Possono anche determinare se gli anticorpi, una macromolecola del sistema immunitario, si attaccano alle proteine che possono essere utilizzate per combattere batteri e virus.