바이 설 파이트 시퀀싱이란 무엇입니까?

바이 설 파이트 시퀀싱은 메틸화를 사용하여 DNA의 다른 영역을 분석하는 방법입니다. 메틸화는 메틸 그룹이라고하는 특정 분자를 뉴클레오티드 (이 경우 일반적으로 시토신)에 첨가하는 과정입니다. 비활성 뉴클레오티드는 종종 메틸화되므로,이 방법은 게놈의 활성 영역 결정에서 유전자가 풍부한 영역 식별에 이르기까지 다양한 목적으로 사용될 수 있습니다. 바이 설 파이트 시퀀싱에서, 메틸화 된 시토신은 시퀀싱 과정에 영향을받지 않는 반면, 메틸화되지 않은 시토신은 유전 물질 인 데 옥시 리보 핵산 (DNA)에서 일반적으로 발견되지 않는 뉴클레오티드 인 우라실로 전환됩니다.

이 방법은 메틸화의 변화에 ​​매우 민감하므로 결합의 작은 변화는 연구원에게 특정 뉴클레오티드에 대한 특정 정보를 제공 할 수 있습니다. 중아 황산나트륨은 시토신을 우라실로 전환하지만 메틸화 시토신이 이러한 변화를 겪지 않는 환경에서 발생합니다. 바이 설 파이트 시퀀싱이 완료되면, 원래 DNA는 상당히 다른 분자로 전환되었다. 시토신은 크게 고갈되거나 결석 될 수 있습니다. 이 변환 된 분자에서 사이토 신이 여전히 발견되면, 이는 고려중인 게놈에서 자연적으로 메틸화 된 사이토 신을 나타낸다.

모든 실험 프로토콜과 마찬가지로, 바이 설 파이트 시퀀싱에는 단점이 있습니다. 가장 중요한 단점은 제대로 작동하려면 매우 높은 염분 농도가 필요하다는 것입니다. 이 염은 단일 가닥 DNA를보다 자연스러운 이중 나선으로 어닐링하는 것을 권장하며, 중아 황산나트륨은 이중 가닥 DNA의 일부일 때 항상 시토신에 도달 할 수 없습니다. 염 농도가 너무 높으면 많은 시토신이 우라실로 전환되지 않아 게놈 내에서 메틸화 된 시토신이 잘못 식별 될 수 있습니다. 위양성 확인 횟수를 최소화하기 위해 변성제가 필요할 수 있습니다.

바이 설 파이트 시퀀싱에는 대량의 게놈 데이터가 필요하지 않으므로,이 방법은 임상 시료를 분석하는 유용한 응용 프로그램이 있습니다. 원래 핵산 소스는 중요하지 않지만 소스는 DNA 여야합니다. 이론적으로, 리보 핵산 (RNA)은 대부분의 RNA가 단일 가닥이고 차단 된 뉴클레오티드로 인해 오 탐지에 취약하지 않기 때문에이 방법을 사용하여 시퀀싱 될 수있다. 그러나 실제로 적용 할 때, 바이 설 파이트 시퀀싱은 RNA에 자연적으로 우라실이 있기 때문에 RNA에는 유용하지 않습니다. 외부 마킹 또는 프로토콜에 대한 추가가 없다면, 전환 된 시토신은 천연 우라실과 구별 할 수 없을 것입니다.

모든 유형의 시퀀싱 방법론을 수행 할 때는 정확성과 정밀성이 필수적입니다. 바이 설 파이트 시퀀싱과 같은 민감한 방법은 신뢰할 수있는 서열 분석 수단을 제공하여 약물 및 요법의 표적을 유전자 분석하고 식별 할 수 있습니다. 이 방법을 살아있는 사람에게 사용할 수는 없지만 가장 작은 조직 샘플 만 사용하면 큰 도움이 될 수 있습니다.