ELISA 감지 란 무엇입니까?

효소 결합 면역 흡착 분석 (ELISA)은 생물학적 샘플에서 단백질의 수준을 결정하기 위해 면역학 실험실에서 수행되는 테스트입니다. ELISA 검출은 투명한 용액 또는 기질이 결합 된 효소-표지 된 항체를 함유하는 플라스틱 판에 첨가되는 시험의 최종 단계를 지칭한다. 효소는 기질을 절단하고 색 변화가 발생합니다. 최종 착색 용액의 흡광도는 ELISA 플레이트 리더 또는 분광 광도계에서 측정된다.

ELISA 테스트에는 여러 가지 유형이 있으며, 가장 일반적인 두 가지는 간접 ELISA와 캡처 또는 샌드위치 ELISA입니다. 간접 ELISA는 환자의 혈청에서 항체로 알려진 단백질을 검출하는 데 사용됩니다. 간접 ELISA 시험의 예는 HIV에 대한 항체를 검출하기 위해 사용되는 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV) 시험이다. 샌드위치 ELISA 테스트는 단백질 또는 항원을 두 항체 사이에 포획하여 검출합니다. 임신 중 증가하는 호르몬 인간 융모 성 성선 자극 호르몬 (hCG)의 검출은 샌드위치 ELISA 테스트로 수행됩니다.

두 시험 모두 분석 마지막에 ELISA 검출 단계가 있습니다. 이 단계는 효소 분자가 부착 된 항체의 첨가를 포함한다. 효소-표지 된 항체의 첨가 후, 그 효소에 특이적인 기질 분자를 함유하는 무색 용액이 첨가된다. 효소는 기질 분자를 절단하고 사용 된 조합에 따라 용액의 색이 변합니다. 환자 샘플에서 항체 또는 항원의 양의 결정은 색 변화의 강도를 측정함으로써 수행된다.

ELISA 검출 단계에서 사용 가능한 여러 효소 기질 조합이있다. 가장 일반적인 효소는 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 (HRP)이며, 이는 기질 분자 오르토-페닐 렌 디아민 디 히드로 클로라이드 (OPD) 및 테트라 메틸 벤지딘 (TMB)을 절단 할 수있다. OPD 및 TMB 둘 모두의 절단은 황색을 띠고, 이들 기판의 광의 광학 밀도 또는 흡광도는 ELISA 플레이트 판독기에 의해 측정된다. OPD의 흡광도는 490 나노 미터 (nm)의 파장에서 측정되고 TMB는 450nm에서 측정됩니다.

ELISA 검출 단계에서 사용되는 다른 일반적인 효소는 알칼리성 포스파타제이다. 이 효소는 기질 p- 니트로 페닐 포스페이트 (PNPP)와 함께 사용되며 황색 용액도 생성합니다. PNPP는 405nm의 파장에서 빛을 흡수합니다.

효소 기질 조합의 선택은 일반적으로 어떤 효소-표지 된 항체가 상업적으로 이용 가능한지, 및 광 흡수를 측정하기 위해 어떤 장비가 사용될 것인지에 기초한다. ELISA 감지를위한 다양한 조합은 ELISA 테스트를 매우 다양하게 만듭니다. 질병 검사 및 연구 실험실에서 중요한 도구입니다.