북부 블롯은 무엇입니까?

북부 블롯 혼성화는 샘플에서 메신저 RNA (mRNA) 수준을 검출하고 존재하는 mRNA의 양을 정량화하는 데 사용되는 기술입니다. 다른보다 강력한 기술이 존재하지만, Northern Blot은 단순성과 사용 편의성으로 인해 표준으로 남아 있습니다. 북부 블 롯팅 기술은 또한 단일 실험에서 여러 샘플을 직접 비교할 수 있습니다.

메신저 RNA는 유전자가 발현 될 때 생성되는 핵산의 한 유형입니다. 세포 내에서 전환되고 기능적 인 유전자는 mRNA로 전사된다. 이어서, mRNA를 세포의 세포질로 옮겨서 단백질로 번역된다. 따라서 세포 mRNA 샘플의 북부 블롯 분석은 세포가 생성하는 단백질의 어레이에 대한 유용한 정보를 제공 할 수있다.

북부 블롯에서, mRNA는 세포에서 추출되고 변성 아가 로스 겔 전기 영동을 통해 실행되며, 이는 크기에 따라 샘플에서 mRNA를 분리 할 수있다. SA알려진 크기의 mRNA 분자의 mples는 대조군을 제공하기 위해 동시에 실행된다. 전기 영동이 완료되면, 샘플은 일반적으로 나일론과 같은 물질로 만들어진 고체 막상에서 전달되고 고정화된다. 이어서, 샘플을 분석 전에 몇 시간 동안 방사성 표지 프로브에 노출시킨다. 분석 동안, 방사성 표지 프로브에 혼성화 된 mRNA는 X- 선을 사용하여 명확하게 검출 될 수있다.

북부 블 롯팅 기술은 상이한 조직 유형 사이의 유전자 발현 패턴을 관찰 할 수있게한다. 다양한 조직 및 장기 유형의 세포에서 추출한 메신저 RNA를 비교할 수 있으며, 스트레스, 감염 및 기타 여러 자극에 대한 세포 반응을 검사 할 수 있습니다. 다른 조건 하에서 mRNA 발현의 차이를 살펴보면, 과학자는 특정 자극에 반응하여 세포가 생산하는 단백질의 유형을 결정할 수있다. 이것은 할 수 있습니다알려지지 않은 단백질의 기능 또는 알려진 단백질의 경우 해당 자극에 대한 세포 반응에 대한 정보를 제공합니다.

예를 들어,

북부 블롯은 미지의 단백질의 발현이 특정 독소의 존재에 반응하여 증가 함을 보여줄 수있다. 그런 다음 단백질이 아마도 화학 물질을 세포 밖으로 옮기거나 대사 산물로 전환함으로써 독성을 감소시키는 데 관여한다는 것이 이론화 될 수 있습니다. 알려진 단백질이 검사중인 경우, 단백질 발현의 변화를 기록하면 반응 자체에 대한 정보를 제공 할 수 있습니다. 예를 들어, 알려진 분자 수송 체의 발현이 증가한 경우, 독소에 대한 세포 반응이 독소를 세포 밖으로 옮기는 것임을 확인할 수있다.