노던 오점이란?

노던 블롯 혼성화는 샘플에서 메신저 RNA (mRNA) 수준을 검출하고 존재하는 mRNA의 양을 정량화하는데 사용되는 기술이다. 다른 강력한 기술이 존재하지만, 노던 블롯은 단순성과 사용 편의성으로 인해 표준으로 남아 있습니다. 노던 블 롯팅 기법을 사용하면 단일 실험에서 여러 샘플을 직접 비교할 수 있습니다.

메신저 RNA는 유전자가 발현 될 때 생성되는 핵산의 한 유형입니다. 세포 내에서 스위치 온되고 기능적인 유전자는 mRNA로 전사된다. mRNA는 세포의 세포질로 운반되어 단백질로 번역됩니다. 따라서, 세포 mRNA 샘플의 노던 블롯 분석은 세포가 생산하는 단백질의 배열에 대한 유용한 정보를 제공 할 수있다.

노던 블롯에서, mRNA는 세포로부터 추출되고 변성 아가 로스 겔 전기 영동을 통해 진행되며, 이는 샘플의 mRNA가 크기에 따라 분리 될 수있게한다. 알려진 크기의 mRNA 분자 샘플을 동시에 실행하여 대조군을 제공합니다. 전기 영동이 완료되면, 샘플은 일반적으로 나일론과 같은 재료로 만들어진 고체 막에 옮겨 고정됩니다. 이어서, 샘플을 분석 전에 수 시간 동안 방사성 표지 된 프로브에 노출시킨다. 분석 동안, 방사선 표지 된 프로브에 혼성화 된 mRNA는 x- 선을 사용하여 명확하게 검출 될 수있다.

노던 블 롯팅 기술은 상이한 조직 유형 사이의 유전자 발현 패턴을 관찰 할 수있게한다. 다양한 조직 및 기관 유형의 세포에서 추출한 메신저 RNA를 비교하고 스트레스, 감염 및 기타 여러 자극에 대한 세포 반응을 검사 할 수 있습니다. 다른 조건에서 mRNA 발현의 차이를 조사함으로써 과학자는 특정 자극에 반응하여 세포가 어떤 유형의 단백질을 생산하는지 결정할 수 있습니다. 이것은 알려지지 않은 단백질의 기능에 대한 단서를 제공하거나 알려진 단백질의 경우 해당 자극에 대한 세포 반응에 대한 정보를 제공 할 수 있습니다.

예를 들어, 노던 블롯은 특정 독소의 존재에 반응하여 미지의 단백질의 발현이 증가 함을 보여줄 수있다. 그런 다음 단백질이 세포 밖으로 화학 물질을 운반하거나 대사 산물로 변환하여 독성을 줄이는 데 관여한다고 이론화 할 수 있습니다. 알려진 단백질이 검사중인 경우 단백질 발현의 변화를 문서화하면 반응 자체에 대한 정보를 제공 할 수 있습니다. 공지 된 분자 수송 체의 발현이 증가 된 경우, 예를 들어 독소에 대한 세포 반응이 독소를 세포 밖으로 수송하는 것이 확인 될 수있다.