펩티드 정제 란?

펩타이드는 아미노산으로 구성된 작은 폴리머입니다. 많은 사람들이 호르몬, 독소로 생물학적으로 활동적이거나 다른 능력을 가지고 있습니다. 이러한 화합물은 생물학, 의료 및 화학 연구에 자주 사용됩니다. 또한 단백질의 수가 서로 연결될 때 단백질의 구성 요소로 사용됩니다. 펩티드 정제는 다량의 목적하는 펩티드를 정제하거나 단백질의 소화로부터 생성 된 펩티드를 분리하는 데 사용되는 기술이다.

펩티드의 정제는 물리적 매트릭스에 차별적으로 결합하는 화합물을 분리하는 방법 인 크로마토 그래피 기술을 사용하여 달성된다. 펩티드 정제에는 고압 액체 크로마토 그래피 (HPLC)가 일반적으로 사용됩니다. 펩티드 (들)은 고압에서 작은 비드의 컬럼을 가로 질러 펌핑 될 때 시간이 지남에 따라 변화하는 용매의 혼합물에 적용된다. 상이한 펩티드는 다양한 시점에서 용리되고 모니터, 종종 UV 분광 광도계에 의해 검출된다.

펩티드에 대한 연구를 수행 할 때 종종 관심 물질이 드물고 화학 회사에서 구입할 수 없습니다. 원하는 펩티드의 구조가 공지 된 경우, 화합물을 천연 공급원으로부터 분리하는 것보다 펩티드 합성에 의해 화학적으로 제조하는 것이 종종 더 쉽다. 천연물 분리는 매우 어렵다. 합성 펩티드는 일반적으로 HPLC에 의해 정제된다.

이러한 화학 합성은 화학자가 아닌 독립적 인 연구원에게는 어려울 수 있습니다. 종종이 작업은 이러한 기술을 전문으로하는 펩티드 합성 회사와 계약을 맺습니다. 실험실에서 처음부터 시스템을 설정하는 것보다 경제적 일 수 있습니다. 펩티드 회사는 연구원의 필요에 따라 맞춤형 펩티드를 만들 수 있습니다.

펩티드 정제의 또 다른 이유는 연구원이 단백질을 정제하고 단백질의 동일성을 확인하려고 할 때 발생할 수 있습니다. 그 또는 그녀는 단백질을 펩티드 단편으로 분해하고, 정제에 의해 단편을 분리하고, 컬럼으로부터 용출 될 때 질량 분석계에 의해 검출 된 펩티드의 단편화 패턴을 가질 수있다. 이 기술은 액체 크로마토 그래피-질량 분석의 약자 인 LC-MS로 알려져 있습니다. 그것은 단편의 분자량 및 아미노산 조성을 제공하고, 유사하거나 동일한 것들이 이전에 확인 된 경우 종종 단백질의 식별을 가능하게한다.

많은 연구자들은 비 천연 아미노산과 같은 새로운 기능을 가진 펩타이드를 연구하여 특이한 생물학적 활동을 가진 펩타이드를 찾고 있습니다. 이러한 신규 펩티드의 연구에 전념하는 펩티 도미 메틱 (peptidomimetics)이라 불리는 전 분야가있다. 종종, 컴퓨터 생성 서열이 설계되고, 다양한 비정형 펩티드를 포함하는 펩티드 라이브러리가 합성된다. 펩티드 정제는 생물학적 활성을 테스트하기 위해 순수한 펩티드를 제공하기 위해이 라이브러리의 개별 구성원을 분리하는 데 사용됩니다. 이 전략은 하나 이상의 새로운 상업적으로 이용 가능한 약물을 생성하는데 성공적이었다.

다수의 생물학적 활성 펩티드는 의학적 용도에 관심이있다. 인슐린과 같은 상업적으로 사용되는 화합물은 일반적으로 다량의 원하는 화합물을 생성하는 재조합 DNA 과발현 시스템에 의해 생성된다. 종종, 펩티드는 일부 종류의 태그를 그들의 전방에 첨가함으로써 정제를 용이하게하도록 유전자 조작된다. 이것은 친 화성 크로마토 그래피를 사용하여 펩티드를 정제 할 수있게한다.

이러한 유형의 크로마토 그래피에서, 태그는 히스티딘과 같은 화합물로, 태그와 결합하는 능력을 위해 선택된 니켈과 같은 비드의 매트릭스에 결합합니다. 원하지 않는 단백질 및 펩티드는 일반적으로 결합없이 컬럼을 통과한다. 구체적으로 설계된 펩티드는 일반적으로 컬럼에 강하게 결합한다. 오염 단백질 및 펩티드가 세척 된 후, 원하는 펩티드는 매트릭스에 결합하기 위해 경쟁하는 화합물에 의해 용리된다. 이어서, 원하는 펩티드의 상당히 순수한 제조물을 가지며, 태그는 절단에 의해 제거 될 수있다.