Wat zijn de stappen in de ELISA-procedure?
De ELISA-procedure begint in de kliniek, waarbij een bloedmonster van de patiënt wordt genomen. Een aantal stappen worden vervolgens gevolgd met behulp van de ELISA-testkit in het laboratorium. De test zal de aanwezigheid van antilichamen of antigenen tegen een ziekte, zoals HIV, in het bloed detecteren. De stappen omvatten toevoeging van verschillende stoffen en wassen en resultaten worden in het algemeen gemeten door een kleurverandering.
De enzymgebonden immunosorbentassay (ELISA), die ook wordt aangeduid als de enzymimmunoassay (EIA), wordt gebruikt als een diagnostische test. Het is het meest bekend als een diagnostische test voor HIV. De testplaat bestaat gewoonlijk uit 96 kleine putjes waarin een specifiek antigeen is geïmmobiliseerd. Als het antilichaam aanwezig is in het serummonster, zal het binden aan het antigeen, waardoor detectie mogelijk is via de verschillende stappen van de ELISA-procedure.
De eerste stap in de ELISA-procedure is het verkrijgen van een monster van de patiënt. Dit wordt gedaan door een verpleegkundige, onder steriele omstandigheden. Het bloed wordt meestal uit een ader in de arm of hand genomen. Een tourniquet wordt op de arm geplaatst om de ader te laten zwellen en de procedure te vergemakkelijken en de huid wordt gereinigd waar de naald wordt ingebracht. Een kleine prik kan worden gevoeld als de naald erin gaat en het bloed wordt verzameld in een steriele buis.
Nadat het bloedmonster is genomen, wordt het overgebracht naar het laboratorium waar de rest van de ELISA-procedure wordt uitgevoerd door een laborant. Het bloedmonster wordt eerst toegevoegd aan de putjes van de ELISA-plaat. Als het specifieke antilichaam aanwezig is, bindt het aan het antigeen. De plaat wordt vervolgens gewassen met behulp van een buffer om ongebonden antilichamen te verwijderen.
Een tweede antilichaam, normaal van dierlijke oorsprong, waaraan een enzym is gehecht, wordt vervolgens toegevoegd, dat aan het antilichaam-antigeencomplex zal binden. De plaat wordt opnieuw gewassen om overmaat te verwijderen. Het enzym is kleurreactief wanneer een substraat wordt toegevoegd aan het einde van de ELISA-procedure. Het is de meting van de mate van kleurverandering die het resultaat geeft.
De ELISA-procedure moet zorgvuldig worden gevolgd om valse resultaten te voorkomen. In de meeste ELISA-platen is een positieve en negatieve controle opgenomen om dergelijke valse resultaten te minimaliseren. Bij het testen op HIV wordt een positief resultaat meestal opgevolgd door een tweede bevestigende test, vaak van een ander type, zoals een Western Blot.