Wat zijn de stappen in de ELISA -procedure?
De ELISA -procedure begint in de kliniek, waarbij een bloedmonster van de patiënt wordt gehaald. Een aantal stappen worden vervolgens gevolgd met behulp van de ELISA -testkit in het laboratorium. De test zal de aanwezigheid van antilichamen of antigenen tegen een ziekte, zoals HIV, in het bloed detecteren. De stappen omvatten toevoeging van verschillende stoffen en wassen en resultaten worden in het algemeen gemeten door een kleurverandering.
De enzym-gekoppelde immunosorbent-test (ELISA), die ook wordt genoemd als het enzym-immunoassay (EIA), wordt gebruikt als een diagnostische test. Het is het meest bekend als een diagnostische test voor HIV. De testplaat bestaat meestal uit 96 kleine putten waarin een specifiek antigeen wordt geïmmobiliseerd. Als het antilichaam aanwezig is in het serummonster, zal het binden aan het antigeen, waardoor detectie via de verschillende stappen van de ELISA -procedure mogelijk is.
De eerste stap in de ELISA -procedure is om een monster van de patiënt te verkrijgen. Dit wordt gedaan door een verpleegkundige, onder steriele omstandigheden. Het bloed wordt meestal uit een geest gehaaldin de arm of hand. Een tourniquet wordt op de arm geplaatst om de ader op te zwellen en de procedure gemakkelijker te maken en de huid wordt gereinigd waar de naald wordt ingebracht. Een kleine lul kan worden gevoeld als de naald naar binnen gaat en het bloed zal worden verzameld in een steriele buis.
Nadat het bloedmonster is genomen, wordt het overgebracht naar het lab waar de rest van de ELISA -procedure wordt uitgevoerd door een laboratoriumtechnicus. Het bloedmonster wordt eerst toegevoegd aan de putten van de ELISA -plaat. Als het specifieke antilichaam aanwezig is, bindt het aan het antigeen. De plaat wordt vervolgens gewassen met een buffer om ongebonden antilichamen te verwijderen.
Een tweede antilichaam, normaal gesproken van dierlijke oorsprong, die een enzym heeft dat eraan is bevestigd, wordt vervolgens toegevoegd, dat zal binden aan het antilichaam-antigeencomplex. De plaat is opnieuw gewassen om overtollig te verwijderen. Het enzym is kleurreactief wanneer een substraat wordt toegevoegd aan het einde van de ELISA-procedure. Het is thE Meting van de mate van kleurverandering die het resultaat geeft.
De ELISA -procedure moet zorgvuldig worden gevolgd om valse resultaten te voorkomen. In de meeste ELISA -platen is een positieve en negatieve controle opgenomen om dergelijke valse resultaten te minimaliseren. Bij het testen op HIV wordt een positief resultaat meestal opgevolgd door een tweede, bevestigende, test, vaak van een ander type, zoals een Western -blot.