Wat is een elektroforetische mobiliteitsverschuivingsassay?

Een assay is een test die is ontworpen om de originele stukken van een cel te scheiden in delen die gemakkelijk te identificeren zijn. Elektroforetische mobiliteitsverschuivingsassay is een experiment dat elektriciteit gebruikt om macromoleculen, zoals eiwitten, door een gelmatrix te verplaatsen om een ​​scheiding tussen de verschillende macromoleculen op basis van grootte te veroorzaken. Net als een autobatterij bevinden de negatieve en positieve uiteinden zich aan weerszijden van de elektroforetische mobiliteitsverschuivingsbepaling of gelverschuivingsbepaling. Dit zorgt ervoor dat elektriciteit de macromoleculen aantrekt op basis van lading. Elke macromolecule beweegt met een andere snelheid, omdat kleinere minder interferentie van de gel ervaren.

Verschillende stappen zijn nodig om een ​​elektroforetische mobiliteitsverschuivingsassay op te zetten. De macromoleculen die moeten worden gescheiden, moeten eerst worden voorbereid. De meeste macromoleculen worden verkregen uit levende cellen en vereisen specifieke procedures. Het verkrijgen van de te scheiden delen vereist vaak een centrifuge en een chemische reactie die de cellen afbreekt. De centrifuge zal een injectieflacon met hoge snelheid laten draaien en een korrel van de benodigde macromoleculen vormen. Dit wordt opgelost en vaak wordt een kleur of ander label toegevoegd om de gelverschuivingsassay te volgen.

De gel, soms het bed genoemd, moet ook vers worden gemaakt van een precies mengsel van poedervormige agarose en water dat snel van vloeistof in gel verandert. Gewoonlijk zal een elektroforetische mobiliteitsverschuivingsassay verschillende banen hebben voor afzonderlijke assays, die worden gebruikt om verschillende macromolecuulmengsels te vergelijken. Eén rijstrook wordt altijd ingesteld als een besturingselement en heeft meestal maar één soort macromolecuul.

De stroombron moet zorgvuldig worden geselecteerd en is pas aangesloten als alles klaar is. De hoeveelheid tijd dat de stroom is ingeschakeld, bepaalt de mobiliteitsverschuiving van de macromoleculen. Het is belangrijk om de stukken voldoende te scheiden voor een goede analyse. Als de stroom niet correct wordt getimed, zijn toekomstige vergelijkingen ook onnauwkeurig. De richting van de macromoleculen zal worden bepaald door welke lading ze van nature bezitten - de meeste bewegen naar het negatieve einde.

Eenvoudige genetische tests en eiwitanalyses worden meestal gedaan met een elektroforetische mobiliteitsverschuivingsassay. Dit wordt weergegeven door verschillende verschuivingen in verschillende rijstroken. Als er een interactie optreedt, combineren de macromoleculen zich en lopen ze langzamer door de matrix in vergelijking met de controlelaan met slechts één macromolecuul. Gel shift-assays worden gebruikt om genetische resultaten snel te elimineren of te bevestigen. Ze kunnen ook bepalen of antilichamen, een macromolecuul van het immuunsysteem, vasthouden aan eiwitten die kunnen worden gebruikt om bacteriën en virussen te bestrijden.

ANDERE TALEN

heeft dit artikel jou geholpen? bedankt voor de feedback bedankt voor de feedback

Hoe kunnen we helpen? Hoe kunnen we helpen?