Wat is totale RNA-isolatie?
Totale isolatie van ribonucleïnezuur (RNA) is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om al het cellulaire RNA uit een weefselmonster te extraheren. Dit verschilt van andere verwerkingsmethoden die selectief bepaalde soorten RNA eruit halen. Een onderzoeker wil bijvoorbeeld messenger RNA (mRNA) inspecteren en zou met een monster kunnen werken om alleen dit genetische materiaal te extraheren. Er zijn een aantal laboratoriumprotocollen beschikbaar voor totale RNA-isolatie, met behulp van een verscheidenheid aan producten gemaakt door wetenschappelijke leveranciers.
Het verzamelen van al het cellulaire RNA uit een weefselmonster kan een aantal voordelen bieden. Het kan meer pure en bruikbare informatie opleveren. Met de techniek kunnen onderzoekers ook controleren op degradatie die problemen met experimenten kan veroorzaken. Als het monster van slechte kwaliteit is, kan de onderzoeker opnieuw RNA extraheren om een schonere en nuttiger verzameling RNA te krijgen. Dit kan belangrijk zijn voor veel soorten onderzoek, waar slecht RNA in het begin problemen veroorzaakt met experimenten langs de lijn.
Technieken voor totale RNA-isolatie kunnen verschillende chemische agentia omvatten. Sommige richten zich op het gebruik van niet-toxische chemicaliën om het risico op schade aan het monster te verminderen. Dergelijke chemicaliën beperken ook de stroomafwaartse vervuiling van RNA en zijn veiliger voor laboranten. Labs hebben de neiging een specifieke chemische stof en protocol te selecteren om aan te bevelen aan al het personeel en nemen een gedetailleerde beschrijving van de totale RNA-isolatieprocedure op in hun handleidingen. Dit zorgt voor consistentie in RNA-verwerking in de faciliteit om stabielere en bruikbare resultaten te leveren.
Het proces begint met de voorbereiding van een weefselmonster, dat in grootte kan variëren, om het gereed te maken voor behandeling, waarbij chemische reagentia het totale RNA uittrekken. Technici raadplegen de handleiding van het laboratorium om te bepalen hoe het monster moet worden behandeld en behandeld om het RNA te isoleren. Ze kunnen hulpmiddelen zoals elektroforeseplaten gebruiken om de kwaliteit van het monster te controleren, op zoek naar tekenen van degradatie die op een probleem met het totale RNA-isolatieproces kunnen wijzen.
Onderzoekers kunnen hun eigen totale RNA-isolatie uitvoeren of deze taak delegeren aan een laboratoriumassistent, afgestudeerde student of soortgelijke laboratoriumwerker. Het is ook mogelijk om isolatie uit te besteden aan andere laboratoriumfaciliteiten. Dit kan soms nodig zijn om de integriteit van een experiment te beschermen, door een derde partij te gebruiken om verifieerbare en herhaalbare resultaten te genereren. In wetenschappelijke publicaties op basis van onderzoek met het geïsoleerde RNA moet de onderzoeker de methode bespreken die wordt gebruikt voor isolatie en wie het werk heeft uitgevoerd.