Hva er trinnene i ELISA-prosedyren?

ELISA-prosedyren begynner på klinikken, med en blodprøve som blir tatt fra pasienten. Et antall trinn følges deretter ved bruk av ELISA-testsettet i laboratoriet. Testen vil påvise tilstedeværelsen av antistoffer eller antigener mot en sykdom, som HIV, i blodet. Trinnene inkluderer tilsetning av forskjellige stoffer og vasking, og resultatene blir generelt målt ved en fargeendring.

Den enzymkoblede immunosorbentanalysen (ELISA), som også blir referert til som enzymet immunoassay (EIA), blir brukt som en diagnostisk test. Det er mest kjent som en diagnostisk test for HIV. Testplaten består vanligvis av 96 små brønner hvori et spesifikt antigen er immobilisert. Hvis antistoffet er til stede i serumprøven, vil det binde seg til antigenet, og tillate deteksjon via de forskjellige trinnene i ELISA-prosedyren.

Det første trinnet i ELISA-prosedyren er å skaffe en prøve fra pasienten. Dette gjøres av en sykepleier, under sterile forhold. Blodet tas vanligvis fra en blodåre i armen eller hånden. En turnett plasseres på armen for å hovne vene og gjøre prosedyren enklere og huden blir renset der nålen skal settes inn. En liten stikk kan merkes når nålen går inn og blodet blir samlet i et sterilt rør.

Etter at blodprøven er tatt, blir den overført til laboratoriet hvor resten av ELISA-prosedyren vil bli utført av en laboratorietekniker. Blodprøven blir først tilsatt til brønnene på ELISA-platen. Hvis det spesifikke antistoffet er til stede, binder det seg til antigenet. Platen vaskes deretter ved bruk av en buffer for å fjerne ubundne antistoffer.

Deretter tilsettes et andre antistoff, normalt av animalsk opprinnelse, som har et enzym som er knyttet til det, som vil binde seg til antistoff-antigen-komplekset. Platen vaskes igjen for å fjerne overflødig. Enzymet er fargereaktivt når et substrat tilsettes ved slutten av ELISA-prosedyren. Det er målingen av graden av fargeendring som gir resultatet.

ELISA-prosedyren må følges nøye for å unngå falske resultater. I de fleste ELISA-plater er en positiv og negativ kontroll inkludert, for å minimere slike falske resultater. Når du tester for HIV, vil et positivt resultat vanligvis følges opp av en andre, bekreftende test, ofte av en annen type, for eksempel en Western Blot.