Hva er en Biotin-antistoff?

I motsetning til hva man først skulle tro, er et biotinantistoff ikke et stoff som er oppdratt mot biotin. Snarere er et biotinantistoff et antistoff som er blitt konjugert til biotin. Biotin binder seg sterkt til en ligand - avidin - som igjen kan konjugeres til lysdetekterbare molekyler som fluoroforer. Biotin og avidin er en av de sterkeste biologisk relevante kovalente bindinger som er kjent, noe som gjør biotin- og avidinkonjugert ligand / reseptorenhet spesielt nyttig i vitenskapelige studier.

Biotin er et B-kompleks vitamin - vitamin B7. Det er et så lite molekyl at flere biotinmolekyler kan konjugeres til et enkelt monoklonalt eller polyklonalt antistoff. Det faktum at biotin også er vannløselig gir større allsidighet i buffersystemer enn om det var uoppløselig. For større spesifisitet anbefales ofte monoklonal antistoff-konjugering til biotin fremfor polyklonal antistoff-konjugering. Biotinmolekylet kan bindes direkte med antistoffet av interesse, eller det kan kobles gjennom en molekylær hale for å gi større bevegelsesfrihet.

Biotinliganden avidin finnes i eggalbumin. Det kan være billig laget og enkelt isolert. Flere avidinmolekyler vil binde seg til hver biotinreseptor og amplifisere et enkelt antistoffdeteksjonssignal. Når et biotinantistoff fester seg til et antigen av interesse, kan en eksperimentator eksponere komplekset for avidin konjugert til fluoroforer, noe som gjør komplekset detekterbart. Gjennom fluorescerende avbildning kan biotinantistoffet og avidin-konjugert ligand detekteres med lysmikroskopi, og antigener av interesse kan studeres in situ .

Selv om dannelse og bruk av et biotinantistoff og et fluorescerende merket avidinmolekyl er en vanlig løsning for antigendeteksjon, eksisterer det alternativer som fortsatt benytter seg av biotin / avidinkomplekset. Binding av biotin til en ligand som et nevrotoksin kan være fordelaktig når det gjelder å påvise plassering av nevronale reseptorer påvirket av nevrotoksinet det er snakk om. Det er også mulig å konjugere biotin til en nukleotidsekvens slik som messenger ribonukleinsyre (mRNA) for å finne hvor disse nukleotidsekvensene blir oversatt til proteiner eller for å påvise cellulær mRNA-regulering.

Det er mulig å kjøpe biotinylerte polyklonale eller monoklonale antistoffer, selv om biotinylert antistoffproduksjon er innenfor mange eksperimenters evne. Protokoller kan bli funnet på nettet som antyder antistoffbiotinyleringsmetoder, selv om de enklest fulgte protokollene kobler biotin direkte til et antistoff i stedet for å antyde hvordan man interkalerer en molekylær avstand. Molekylære avstander mellom biotin og dets tilknyttede antistoff muliggjør større avstand for å eksponere flere molekyler for bindingssteder, og disse biotinantistoffene blir vanligvis kjøpt i stedet for å lage dem.