Hva er et biotinantistoff?

I motsetning til hva man først tror, ​​er et biotinantistoff ikke et stoff som blir reist mot biotin. Snarere er et biotinantistoff et antistoff som har blitt konjugert til biotin. Biotin binder sterkt til en ligand-avidin-som igjen kan konjugeres til lysdetekterbare molekyler som fluoroforer. Biotin og avidin danner en av de sterkeste biologisk relevante kovalente bindinger som er kjent, noe som gjør biotin- og avidin-konjugerte ligand/reseptorenheter spesielt nyttige i vitenskapelige studier.

Biotin er et B-kompleks vitamin-vitamin B7. Det er et så lite molekyl at flere biotinmolekyler kan konjugeres til et enkelt monoklonalt eller polyklonalt antistoff. At biotin også er vannløselig, gir større allsidighet i buffersystemer enn om det var uoppløselig. For større spesifisitet anbefales ofte monoklonalt antistoffkonjugasjon til biotin over polyklonalt antistoffkonjugering. Biotinmolekylet kan være direkte BONded med antistoffet av interesse, eller det kan kobles gjennom en molekylær hale for å gi mulighet for mer bevegelsesfrihet.

Biotinliganden avidin finnes i eggalbumin. Det kan være billig laget og lett isolert. Flere avidinmolekyler vil binde seg til hver biotinreseptor, og forsterker et enkelt antistoffdeteksjonssignal. Når et biotinantistoff fester seg til et antigen av interesse, kan en eksperimentør deretter utsette komplekset for avidin konjugert til fluoroforer, noe som gjør komplekset påviselig. Gjennom fluorescerende avbildning kan biotinantistoffet og avidin-konjugert ligand påvises med lysmikroskopi, og antigener av interesse kan studeres in situ .

Selv om opprettelsen og bruken av et biotinantistoff og et fluorescerende tagget avidinmolekyl er en vanlig løsning for antigendeteksjon, eksisterer alternativer som fremdeles benytter seg av biotin/avidin -komplekset. Bindende biotin til enLigand som et nevrotoksin kan være fordelaktig når det gjelder å oppdage plassering av neuronale reseptorer som er påvirket av det aktuelle nevrotoksinet. Det er også mulig å konjugere biotin til en nukleotidsekvens som messenger ribonukleinsyre (mRNA) for å finne hvor disse nukleotidsekvensene blir oversatt til proteiner eller å oppdage cellulær mRNA -regulering.

Det er mulig å kjøpe biotinylert polyklonale eller monoklonale antistoffer, selv om biotinylert antistoffproduksjon er innenfor muligheten til mange eksperimenter. Protokoller kan bli funnet på nettet som antyder antistoffbiotinyleringsmetoder, selv om de mest lett fulgte protokoller direkte koble biotin til et antistoff i stedet for å antyde hvordan man interkalerer et molekylært avstand. Molekylære avstandsstykker mellom biotin og det tilhørende antistoffet gir større avstand for å eksponere flere molekyler for bindingsseter, og disse biotinantistoffene er vanligvis kjøpt i stedet for laget.