Hva er plasmider?

Innenfor mange forskjellige bakterier kan små sirkulære DNA -stykker finnes i cytoplasma. Disse DNA -sirklene er kjent som plasmider, og de er atskilt fra det kromosomale DNA, eller DNA som bærer genene for bakteriecellene. Flere kopier av plasmidene er ofte til stede når som helst i bakteriecellen. Plasmider spiller en veldig viktig rolle i genteknologi, spesielt i genkloning.

Når gener er klonet, foregår prosessen vanligvis innen bakterier. For å få genet som skal klones inn i bakteriene, er en vektor nødvendig. Et plasmid er det som brukes som vektoren, da det lett kan passere fra en celle til en annen.

Det er et antall trinn involvert i genkloning før du setter inn et plasmid i en vertscelle. For det første må genet som skal kopieres isoleres, og det må også plasmidene som skal brukes som vektorer. Når dette er gjort, må genet settes inn i plasmid -DNA. Plasmidet settes deretter inn i bakterienAl vertscelle for replikasjon.

For å isolere plasmider fra bakterieceller, må cellene opprinnelig behandles med enzymer for å bryte ned celleveggene i bakteriene. Det større kromosomale DNA er de adskilt fra de mindre plasmidene ved bruk av en sentrifuge. Det isolerte plasmid -DNA er nå klart til å få genet satt inn i det.

plasmider består av en dobbeltstrenget sirkel av DNA. For å sette inn ønsket gen, kuttes plasmid -DNA med begrensningsenzymer. Disse enzymene kuttet bare DNA ved veldig spesifikke nukleotidsekvenser. Når plasmid -DNA er kuttet, tilsettes linkersekvenser til de løse ender som korrelerer med endene av genet som skal settes inn. Dette sikrer at genet passer nøyaktig inn i plasmidet.

Når genet er satt inn i plasmidet, er det nå klar til å settes inn i en levende bakterie. Bakterier gjenskaper plasmidene sine slik at en enkelt celle kaninneholder mange eksemplarer. Det kan være opptil 200 kopier av et enkelt plasmid i en bakterie. Hvis plasmidet blir introdusert i mange bakterieceller, kan mange kopier av genet produseres relativt raskt, spesielt når bakterieceller replikerer omtrent hvert 20. minutt.

Dette er prosessen som brukes til å skape humant insulin. Genoding for insulin ble isolert og satt inn i et plasmid. Alle plasmidene som inneholdt insulingen ble deretter introdusert i en bakterie, hvor de ble replikert. Bakteriene fortsatte deretter å gjenskape seg selv, slik at mange millioner celler som inneholder insulingen -genet kan opprettes på veldig kort tid. Dette klonede genet gir nå en pålitelig kilde for humant insulin.