Hva er total RNA-isolasjon?
Total ribonukleinsyre (RNA) isolasjon er en laboratorieteknikk som brukes til å trekke ut alt det cellulære RNA fra en vevsprøve. Dette skiller seg fra andre behandlingsmetoder som selektivt trekker ut visse typer RNA. En forsker kan for eksempel ønske å inspisere messenger RNA (mRNA) og kunne jobbe med en prøve for å trekke ut nettopp dette genetiske materialet. Det er en rekke laboratorieprotokoller som er tilgjengelige for total RNA-isolasjon, ved bruk av en rekke produkter laget av vitenskapelige leverandører.
Det kan være en rekke fordeler ved å samle alt det cellulære RNA fra en vevsprøve. Det kan gi mer ren og brukbar informasjon. Teknikken kan også la forskere sjekke for degradering som kan forårsake problemer med eksperimenter. Hvis prøven er av dårlig kvalitet, kan forskeren trekke ut RNA igjen for å få en renere og mer nyttig samling av RNA. Dette kan være viktig for mange typer forskning, der dårlig RNA i starten forårsaker problemer med eksperimenter nedover.
Teknikker for total RNA-isolasjon kan involvere en rekke kjemiske midler. Noen fokuserer på bruk av giftige kjemikalier for å redusere risikoen for skade på prøven. Slike kjemikalier begrenser også forurensning av RNA nedstrøms og er tryggere for laboratoriet. Labs har en tendens til å velge en spesifikk kjemikalie og protokoll som skal anbefales til alt personell og inkluderer en detaljert beskrivelse av den totale RNA-isolasjonsprosedyren i sine manualer. Dette sikrer konsistens i RNA-prosessering på anlegget for å gi mer stabile og nyttige resultater.
Prosessen starter med utarbeidelse av en vevsprøve, som kan variere i størrelse, for å gjøre den klar til behandling hvilke kjemiske reagenser for å trekke ut det totale RNA. Teknikere konsulterer laboratoriehåndboken for å finne ut hvordan du skal håndtere prøven og behandle den for å isolere RNA. De kan bruke verktøy som elektroforeseplater for å sjekke kvaliteten på prøven, på jakt etter tegn på nedbrytning som kan indikere et problem med den totale RNA-isolasjonsprosessen.
Forskere kan utføre sin egen totale RNA-isolasjon eller delegere denne oppgaven til en laboratorieassistent, hovedfagsstudent eller lignende laboratoriearbeider. Det er også mulig å isolere ut andre laboratoriefasiliteter. Noen ganger kan dette være nødvendig for å beskytte integriteten til et eksperiment ved å bruke en tredjepart for å generere verifiserbare og repeterbare resultater. I alle vitenskapelige artikler basert på forskning med det isolerte RNA, må forskeren diskutere metoden som ble brukt for isolasjon, og hvem som utførte arbeidet.