Jak działa testowanie endotoksyn bakteryjnych?
Bakteryjne badanie endotoksyny zwykle obejmuje stosowanie odczynników, które zmieszane w roztworze z możliwym zanieczyszczeniem powodują reakcję, oznaczającą obecność endotoksyny. Testy chromogenne, żelowy i turbidymetryczny to metody powszechnie stosowane przez naukowców do testowania endotoksyn bakteryjnych. Technicy stosują te metody oceny w odniesieniu do różnych substancji i przedmiotów podczas sprawdzania zanieczyszczenia endotoksyną. Woda, surowce używane do wytwarzania leków, sprzętu i opakowań muszą spełniać normy endotoksyny.
Wszystkie bakterie, grzyby i wirusy mają ochronne błony zewnętrzne składające się z lipopolisacharydów, zwanych również LPS. Część lipidowa tych łańcuchów zawiera endotoksyny. Substancje te zwykle pozostają w błonie, ale są uwalniane podczas procesu podziału komórek oraz podczas niszczenia lub lizy komórek. U ludzi substancje te powodują gorączkę, nieprawidłowe krzepnięcie, wstrząs septyczny i inne objawy, chociaż w przeciwieństwie do egzotoksyn w komórce endotoksyny nie przekształcają się w toksoid. Ogólnie rzecz biorąc, mikrobiolodzy sprawdzają obecność endotoksyn związanych z różnymi bakteriami Gram-ujemnymi, w tym E. coli .
Test skrzepu żelowego lub test lizatu ameboecyte Limulus (LAL) obejmuje użycie niszczącej błonę substancji chemicznej pochodzącej z ameboocytów kraba podkowiastego, zwanej także polipulsem Limulus. Technicy obserwują pozytywne wskazanie endotoksyn, jeśli krzepnięcie lub żelowanie występuje, gdy lizat jest narażony na przedmiot lub substancję. Mikrobiolodzy zwykle używają tej metody badania endotoksyny bakteryjnej w połączeniu z badaniami chromogennymi i turbidymetrycznymi w celu uzyskania rozstrzygających wyników.
Chromogenne badanie endotoksyn bakteryjnych wykorzystuje specjalnie potraktowany LAL. Gdy ten lizat kontaktuje się z endotoksyną, reakcja wytwarza określony kolor. Końcowy proces testowania obejmuje pomiar zmętnienia lub zmętnienia roztworu. Technicy wystawiają roztwór powstały w teście skrzepu żelu na spektrofotometr, który emituje wiązkę światła. Mierząc utratę intensywności światła w wiązce przechodzącej przez roztwór, mikrobiologowie mogą ustalić, czy występuje endotoksyna.
Pracownicy laboratorium zazwyczaj wykonują te trzy testy endotoksyny bakteryjnej dwa lub trzy razy, aby zapewnić dokładne wyniki. Test żelowy nie jest stosowany wyłącznie, ponieważ jego najniższy limit wykrywalności wynosi 0,03 jednostki Ehrlicha na mililitr (EU / ml). Testy chromogenne i turbidymetryczne wykrywają endotoksyny w zakresie 0,005 EU / ml. Parametry bezpieczeństwa różnią się znacznie w zależności od badanej substancji. Chociaż sterylna woda używana do iniekcji lub irygacji może zawierać nie więcej niż 0,25 EU / ml, jałowa woda do inhalacji może zawierać do 0,5 EU / ml.