Co to jest protokół ELISA?
Test immunoenzymatyczny (ELISA) jest powszechnym testem stosowanym w immunologii do wykrywania antygenów lub przeciwciał. Antygeny wywołują reakcję układu odpornościowego - innymi słowy, powodują choroby. Test ELISA służy do wykrywania wielu antygenów bakteryjnych i wirusowych, w tym ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV), malarii, cholery, odry i świnki. Nieco inny protokół ELISA może być zastosowany do wykrywania przeciwciał przeciwko tym i wielu innym patogenom. Protokół ELISA to krok po kroku procedura wykonywania określonego testu ELISA.
Chociaż protokół ELISA różni się nieznacznie, w zależności od rodzaju przeprowadzanego testu ELISA, podstawowa koncepcja jest taka sama dla wszystkich z nich. Test ELISA zależy od przeciwciał związanych z enzymem, zwanych także antyglobulinami . Cząsteczka sygnałowa przyłączona do tych antyglobulin powoduje, że substrat dodany podczas testu zmienia kolor, jeśli obecny jest pożądany antygen lub przeciwciało. Ilość obecnego antygenu lub przeciwciała jest proporcjonalna do wielkości zmiany koloru, którą można zmierzyć za pomocą elektronicznego czytnika płytek.
Istnieją trzy główne typy testu ELISA. Bezpośredni test ELISA jest zwykle stosowany raczej do wykrywania antygenów niż przeciwciał. Jest to najprostszy protokół ELISA, ponieważ przeciwciało związane z enzymem wiąże się bezpośrednio z pożądanym antygenem. Następnie dodaje się substrat, aby określić ilość obecnego antygenu.
Pośredni test ELISA służy do wykrywania przeciwciał, podczas gdy inny rodzaj pośredniego testu ELISA - zwany kanapkowym testem ELISA - może być wykorzystywany do wykrywania antygenów. Kanapkowy protokół ELISA wymaga dwóch przeciwciał, zwanych przeciwciałami wychwytującymi i wykrywającymi, aby związać się z pożądanym antygenem. Dodaje się antyglobulinę, która wiąże się z przeciwciałem wykrywającym, i dodaje się substrat. Pośredni test ELISA jest zgodny z podobnym protokołem, ale wykorzystuje raczej antygen wychwytujący niż przeciwciało wychwytujące w celu wykrycia pożądanego przeciwciała.
Konkurencyjny test ELISA jest często stosowany do wykrywania antygenów obecnych w niskich stężeniach, ponieważ jest to bardzo czuły test. W przeciwieństwie do innych protokołów ELISA, w konkurencyjnym teście ELISA stosuje się antygen związany z enzymem zamiast przeciwciała oraz nieco inną metodę kwantyfikacji. W nim próbka zawierająca wykrywany antygen i antygen związany z enzymem są dodawane do przeciwciała, a dwa antygeny konkurują o miejsca wiązania przeciwciała. Po dodaniu substratu zmiana koloru jest większa, przy wyższym stosunku związanych antygenów związanych enzymem do związanych antygenów próbki. Oznacza to, że wyższa zmiana koloru jest wykrywana przy niższych stężeniach antygenu próbki, co czyni tę metodę tak wrażliwą.