Co to jest protokół ELISA?

Test immunosorbent wiążący enzym (ELISA) jest powszechnym testem stosowanym w immunologii do wykrywania antygenów lub przeciwciał. Antygeny wywołują reakcję układu odpornościowego - innymi słowy, powodują choroby. ELISA służy do wykrywania wielu antygenów bakteryjnych i wirusowych, w tym ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV), malarii, cholery, odry i świnki. Nieco inny protokół ELISA można wykorzystać do wykrywania przeciwciał dla tych i wielu innych patogenów. Protokół ELISA jest krokiem krok po kroku wykonywania określonej ELISA.

Chociaż protokół ELISA zmienia się nieznacznie, w zależności od rodzaju wykonywanego ELISA, podstawowa koncepcja jest taka sama dla wszystkich. ELISA zależy od przeciwciał związanych z enzymem, zwanym także antlobulinami . Cząsteczka sygnału przyłączona do tych antyglobulin powoduje, że podłoże dodane podczas testu zmienia kolor, jeśli występuje pożądany antygen lub przeciwciało. Ilość obecnego antygenu lub przeciwciał jest proporcjonalna do ilościzmiany koloru, które można zmierzyć za pomocą elektronicznego czytnika płyt.

Istnieją trzy główne typy ELISA. Direct ELISA jest zwykle stosowany do wykrywania antygenów, a nie przeciwciał. Jest to najprostszy protokół ELISA, ponieważ przeciwciało związane z enzymem wiąże się bezpośrednio z pożądanym antygenem. Następnie dodaje się substrat w celu określenia ilości obecnego antygenu.

pośrednie ELISA jest stosowane do wykrywania przeciwciał, podczas gdy inny rodzaj pośrednią ELISA - zwany kanapką ELISA - można użyć do wykrywania antygenów. Protokół ELISA kanapki wymaga dwóch przeciwciał, zwanych przeciwciałami do przechwytywania i wykrywania, aby wiązać się z pożądanym antygenem. Dodano antyglobulinę, która wiąże się z przeciwciałem wykrywalnym i dodaje się substrat. Pośrednia ELISA jest zgodna z podobnym protokołem, ale używa antygenu przechwytującego, a nie przeciwciało do przechwytywania w celu wykrycia D.esired przeciwciało.

ELISA konkurencyjna jest często stosowana do wykrywania antygenów, które są obecne w niskich stężeniach, ponieważ jest to bardzo czuły test. W przeciwieństwie do innych protokołów ELISA, konkurencyjny ELISA stosuje antygen połączony z enzymem zamiast przeciwciała i nieco inną metodę kwantyfikacji. W nim próbka zawierająca antygen, który ma zostać wykryty, a antygen związany z enzymem są dodawane do przeciwciała, a dwa antygeny konkurują o miejsca wiązania przeciwciał. Po dodaniu substratu zmiana koloru jest większa, z wyższym stosunkiem związanych antygenów związanych z enzymem do związanych antygenów próbki. Oznacza to, że wyższa zmiana koloru jest wykrywana przy niższych stężeniach antygenu próbki, co sprawia, że ​​ta metoda jest tak wrażliwa.