Co to jest koniugat przeciwciała?
Koniugat przeciwciała jest cząsteczką znakującą, którą można zastosować w histologicznych lub enzymatycznych testach wykrywania antygenu w celu zlokalizowania związanych przeciwciał. Działa poprzez fizyczne przyłączenie lub sprzężenie z przeciwciałem, które jest używane do znakowania antygenu będącego przedmiotem zainteresowania. Przeciwciało znakowane do koniugatu przeciwciała jest narzędziem często używanym w badaniach do identyfikacji dokładnej lokalizacji lub ilości interesujących białek lub antygenów, przeciwko którym wytworzono przeciwciało lub przeciwciała.
Testy histologiczne i proteomiczne często opierają się na przeciwciałach jako odczynniku w technikach badawczych, za pomocą których można znakować określone białka. Przez wystawienie antygenu lub białka będącego przedmiotem zainteresowania na przeciwciało, które zostało wzbudzone przeciwko niemu, można oznaczyć antygeny lub białka. Stosując koniugat przeciwciała - to znaczy przeciwciało, które zostało skoniugowane z cząsteczką specjalnie stosowaną lub zsyntetyzowaną w celu łatwego wykrycia - przeciwciała na ich odpowiednich antygenach można następnie zidentyfikować i zbadać. Najczęstszym rodzajem koniugatu przeciwciała jest cząsteczka fluorescencyjna, umożliwiająca identyfikację antygenów w tkance pod mikroskopem fluorescencyjnym. Inne koniugaty obejmują cząsteczki, takie jak peroksydaza chrzanowa, którą stosuje się w koniugacji z przeciwciałami do późniejszego rozwoju z diaminobenzydyną (DAB).
Często pierwotne przeciwciała będą wytwarzane przeciwko specyficznym antygenom, podczas gdy przeciwciała wtórne będą koniugowane do cząsteczek znakujących i wzbudzane przeciwko pierwszorzędowemu przeciwciału. Na przykład, ktoś może być zainteresowany identyfikacją antygenu zwanego Antygenem X. Następnie użyłby, na przykład, przeciwciała wyhodowanego u myszy, które reaguje i przylega do antygenu X. Aby znaleźć miejsce, w którym znaleziono te pierwotne mysie przeciwciała i związane z tymi cząsteczkami antygenu X, zastosowane zostanie następnie wtórne przeciwciało - na przykład jedno wychowane u kozy - które zostanie znakowane koniugatem, który umożliwi wykrycie tego wtórnego przeciwciała w enzymatycznych lub fluorescencyjnych testach mikroskopowych. Do testów lokalizowania antygenów za pomocą mikroskopu elektronowego cząsteczki złota są często stosowane jako koniugat przeciwciała, ponieważ można je wykryć za pomocą wiązki elektronów.
Powodem stosowania pierwotnych i wtórnych przeciwciał zamiast koniugacji przeciwciała, w której przeciwciało pierwotne jest bezpośrednio sprzężone, jest opłacalność. Koniugacja przeciwciał jest droga pod względem czasu i odczynników. Szczególnie w przypadku rzadkich antygenów koniugacja przeciwciał na przeciwciałach pierwotnych nie jest warta kosztów produkcji. Zamiast tego, stosując koniugację przeciwciała na drugorzędowych przeciwciałach, duże ilości skoniugowanego przeciwciała można zsyntetyzować jednocześnie i zastosować w testach z szeregiem pierwotnych przeciwciał dostosowanych do lokalizacji wielu różnych antygenów, dzięki czemu proces produkcji jest opłacalny i opłacalny.
W niektórych przypadkach jednak pierwszorzędowe przeciwciało będzie znakowane w celu zmniejszenia szumu w sygnale wykrywającym z powodu podwyższonego wiązania nieswoistego przeciwciała, które wynika z zastosowania wielu przeciwciał. Chociaż te drogie, bardzo czułe testy będą nadal wymagać tej metody. Możliwe jest zakupienie zestawów, które pozwalają badaczowi znakować koniugaty do własnego własnego przeciwciała, zwiększając koszt odczynnika, ale zmniejszając etapy protokołu i prawdopodobnie zwiększając stosunek sygnału do szumu w końcowym teście wykrywania przeciwciała.