Co to jest koniugat przeciwciał?
Koniugat przeciwciał jest cząsteczką znakującą, która może być stosowana w testach wykrywania antygenu histologicznego lub enzymatycznego w celu zlokalizowania związanych przeciwciał. Działa poprzez fizyczne przywiązanie lub sprzężone z przeciwciałem używanym do oznaczania interesującego antygenu. Przeciwciało, które jest oznaczone do koniugatu przeciwciała, jest narzędziem często stosowanym w badaniach do zidentyfikowania dokładnej lokalizacji lub ilości białek lub interesujących antygenów, na podstawie których podniesiono przeciwciało lub przeciwciała.
Testy histologiczne i proteomiczne często opierają się na przeciwciałach jako odczynników w technikach badań, których określone białka mogą być oznaczone. Odsłaniając antygen lub białko będące przedmiotem zainteresowania przeciwciała, które było przeciwko niemu, można oznaczyć antygeny lub białka. Stosując koniugat przeciwciała - to znaczy przeciwciało, które zostało skoniugowane z cząsteczką specjalnie stosowaną lub zsyntetyzowaną do łatwego wykrycia - następnie można zidentyfikować przeciwciała na ich odpowiednich antygenachD. Najczęstszym rodzajem koniugatu przeciwciał jest cząsteczka fluorescencyjna, umożliwiająca identyfikację antygenów w tkance pod mikroskopem fluorescencyjnym. Inne koniugaty obejmują cząsteczki, takie jak peroksydaza rzodkiewki koni, która jest stosowana w koniugacji z przeciwciałami do późniejszego rozwoju z diaminobenzydyną (DAB).
Często pierwotne przeciwciała będą podniesione w stosunku do określonych antygenów, podczas gdy przeciwciała wtórne zostaną skoniugowane z oznaczaniem cząsteczek i podniesione przeciwko pierwotnemu przeciwciała. Jako przykład można być zainteresowanym identyfikacją antygenu o nazwie antygen X. Można by następnie zastosować na przykład przeciwciało podniesione u myszy, które reaguje i przykleja się do antygenu X., aby można było znaleźć, gdzie te pierwotne przeciwciała myszy znaleziono i związane z tymi cząsteczkami X X, wtórne przeciwciało wtórne byłyby wtórne przeciwciało wtórne przeciwciały, na przykład, jedno, które zostaną oznaczone z koniugiem.Zjadł, co sprawia, że to wtórne przeciwciało można wykryć w testach mikroskopowych enzymatycznych lub fluorescencyjnych. W testach w lokalizacji antygenów za pomocą mikroskopu elektronowego cząsteczki złota są często stosowane jako koniugat przeciwciał, ponieważ można je wykryć za pomocą wiązki elektronowej.
Przyczyną stosowania pierwotnych i wtórnych przeciwciał, zamiast korzystania z koniugacji przeciwciała, w której pierwotne przeciwciało jest bezpośrednio sprzężone, jest opłacalność. Koniugacja przeciwciał jest droga pod względem czasu i odczynników. Zwłaszcza w przypadku rzadkich antygenów koniugacja przeciwciał na pierwotnych przeciwciał nie jest warta kosztu produkcji. Zamiast tego, stosując koniugację przeciwciał na przeciwciałach wtórnych, duże ilości sprzężonego przeciwciała można jednocześnie zsyntetyzować i stosować w testach z szeregiem pierwotnych przeciwciał dostosowanych do lokalizacji wielu różnych antygenów, co czyni proces produkcji wartościowego i kosztowego.
.W niektórych przypadkach jednak zostanie oznaczone podstawowe przeciwciałoZmniejsz szum w sygnale detekcji ze względu na zwiększone niespecyficzne wiązanie przeciwciał, które wynika z zastosowania wielu przeciwciał. Podczas gdy te drogie, bardzo wrażliwe testy nadal będą wymagały tej metody. Możliwe jest zakup zestawów, które pozwalają badaczowi oznaczać koniugaty z własnym wyborem przeciwciałem, zwiększając koszt odczynnika, ale zmniejszenie etapów protokołu i ewentualnie zwiększając stosunek sygnału do szumu w końcowym teście wykrywania przeciwciał.