Co to jest elektroforetyczny test zmiany mobilności?
Test jest testem mającym na celu rozdzielenie oryginalnych elementów komórki na części łatwe do zidentyfikowania. Test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej jest eksperymentem wykorzystującym elektryczność do przemieszczania makrocząsteczek, takich jak białka, przez matrycę żelową w celu spowodowania rozdziału różnych makrocząsteczek na podstawie wielkości. Podobnie jak akumulator samochodowy, bieguny ujemne i dodatnie znajdują się po przeciwnych stronach testu przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej lub testu przesunięcia żelu. Powoduje to, że elektryczność przyciąga makrocząsteczki na podstawie ładunku. Każda makrocząsteczka porusza się z inną szybkością, ponieważ mniejsze z nich mniej wpływają na żel.
Wymagane jest kilka kroków, aby skonfigurować elektroforetyczny test przesunięcia ruchliwości. Makrocząsteczki, które należy rozdzielić, należy przygotować w pierwszej kolejności. Większość makrocząsteczek pochodzi z żywych komórek i wymaga określonych procedur. Uzyskanie części do oddzielenia często wymaga wirówki i reakcji chemicznej, która rozkłada komórki. Wirówka wiruje fiolkę z dużą prędkością i formuje peletki potrzebnych makrocząsteczek. Rozpuszcza się i często dodaje się kolor lub inną etykietę, aby pomóc w śledzeniu testu przesunięcia żelu.
Żel, zwany czasem łóżkiem, musi być również świeżo wykonany z precyzyjnej mieszanki sproszkowanej agarozy i wody, która szybko zmienia się z płynu w żel. Zwykle elektroforetyczny test przesunięcia ruchliwości będzie miał kilka ścieżek dla oddzielnych testów, które są wykorzystywane do porównywania różnych mieszanin makrocząsteczek. Jeden pas jest zawsze ustawiony jako kontrola i zwykle ma tylko jeden rodzaj makrocząsteczki.
Źródło zasilania należy starannie wybrać i nie podłączać, dopóki wszystko nie będzie gotowe. Czas, przez który włączana jest moc, określa przesunięcie ruchliwości makrocząsteczek. Ważne jest, aby oddzielić elementy wystarczająco, aby przeprowadzić odpowiednią analizę. Jeśli moc nie zostanie odpowiednio ustalona w czasie, przyszłe porównania również będą niedokładne. Kierunek makrocząsteczek zostanie określony przez to, jaki ładunek mają one naturalnie - większość przesuwa się w kierunku ujemnego końca.
Proste testy genetyczne i analizy białek są zwykle wykonywane za pomocą testu przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej. Jest to wyświetlane przez różne zmiany na różnych pasach. Jeśli zachodzi interakcja, makrocząsteczki łączą się i biegną wolniej przez matrycę w porównaniu do linii kontrolnej z tylko jedną makrocząsteczką. Testy przesunięcia żelu stosuje się w celu szybkiego wyeliminowania lub potwierdzenia wyników genetycznych, których skomplikowane metody mogą potrwać dłużej. Mogą również ustalić, czy przeciwciała, makrocząsteczka układu odpornościowego, przyklejają się do białek, które można wykorzystać do zwalczania bakterii i wirusów.