Co to jest fluorescencja ilościowa?

Ilościowa fluorescencja to ekspozycja promieniowania emitowanego w próbce. Korzystając z technologii obrazowania, naukowiec może zbierać informacje o próbce i wykorzystywać je do uzyskiwania dodatkowych informacji na temat jej struktury lub funkcji. Takie podejście jest powszechnie stosowane w biologii do badania pojedynczych komórek i całych organizmów. Wymaga dostępu do laboratorium zawierającego sprzęt mikroskopowy i kamery o odpowiedniej czułości. Przykłady zdjęć z tej formy analizy można znaleźć w podręcznikach i artykułach naukowych, a także w dyskusji na temat uzyskanych danych.

Próbki przygotowane do obrazowania mikroskopowego mogą być zabarwione fluorescencyjnymi znacznikami, takimi jak białka, które przyczepiają się do określonych struktur w komórce. Gdy te znaczniki są oglądane przez kamerę w odpowiednich warunkach, zapalają się. Obserwacja oświetlenia może dostarczyć naukowcowi ważnych informacji. Na przykład immunolog poszukujący śladów konkretnego przeciwciała może użyć znacznika do jego identyfikacji. Jest to przykład jakościowej fluorescencji, w której podświetlenie zapewnia ogólne informacje na temat jakości próbki.

W pomiarach fluorescencji ilościowej badacz zbiera określone, mierzalne informacje. Może to obejmować dane dotyczące dokładnej intensywności światła. Dalsze leczenie próbki może zaoferować możliwości zastosowania zaawansowanych technik obrazowania, takich jak odzyskiwanie fluorescencji po fotowybielaniu (FRAP), które dostarczają informacji o ruchu struktur wewnątrz próbek. Wszystkie te ilościowe techniki fluorescencji mogą zapewnić nowy wgląd w to, czym jest struktura, jak funkcjonuje i co zawiera.

Do tego rodzaju prac wymagany jest sprzęt precyzyjny. Wszelkie zabiegi fluorescencyjne dodane do próbki muszą być starannie przygotowane, aby oznaczały pożądane struktury i nic więcej. Sprzęt musi być odpowiednio czuły i skalibrowany, aby potwierdzić, że zbiera dokładne informacje. Jeśli na przykład detektor w aparacie cyfrowym jest wyłączony, może nie zbierać fluorescencji w niektórych częściach próbki lub może generować fałszywy odczyt. W obu przypadkach dane byłyby niepoprawne.

Laboratoria patologiczne mogą wykorzystywać ilościową fluorescencję do oceny niektórych próbek. Ta technika jest również szeroko stosowana w badaniach. Niektóre bardzo uderzające obrazy można opracować za pomocą znaczników fluorescencyjnych w celu oddzielenia struktur, takich jak nerwy lub określone białka. Oprócz tego, że są niezwykłe wizualnie, obrazy mogą zawierać bogactwo informacji dla badaczy z możliwością ich odczytania. Możliwe jest analizowanie ilościowych obrazów fluorescencyjnych za pomocą zaawansowanych programów komputerowych w celu wyodrębnienia większej ilości danych i wygenerowania znaczących wyników.