Co to jest Western Blot?

Western blot to technika analizy laboratoryjnej stosowana do izolowania białek. Może być stosowany w diagnozowaniu niektórych chorób, a także w badaniach różnych białek i procesów. Znane jest, że western blot wiąże się z diagnozą zakażenia HIV, ale można go również wykorzystać do wyszukiwania śladów bydlęcego gąbczastego zapalenia mózgu (BSE) i boreliozy. Próbki wysłane do testowania za pomocą protokołu western blot mogą zwrócić wyniki w ciągu kilku dni do kilku tygodni, w zależności od wydajności laboratorium i pilności.

W western blot próbkę, która może pochodzić z krwi lub tkanki, najpierw poddaje się elektroforezie, aby białka rozdzieliły się pod względem długości. Pasek żelu do elektroforezy z izolowanymi białkami o docelowej długości można zastosować do przeniesienia białek na substrat nitrocelulozowy do następnego etapu testu. Podczas tego etapu do próbki wprowadza się przeciwciało w celu znakowania białek antygenami, do których to przeciwciało się przyczepia.

Po oznaczeniu białka można je łatwo zidentyfikować. W przypadku badania choroby obecność reaktywnego białka wskazuje, że próbka uzyskała wynik dodatni. Zachodnie kleksy rzadko zwracają fałszywe wyniki dodatnie, chociaż może się to zdarzyć czasami, a także mogą zwracać fałszywe wyniki ujemne, w których dana osoba faktycznie ma chorobę, ale nie pokazuje się to w testach przeprowadzonych metodą Western blot. Może to być szczególnie powszechne w przypadkach, gdy czynnik wywołujący chorobę jeszcze się nie zaczął replikować.

Naukowcy mogą wykorzystać wyniki do identyfikacji określonych białek, które śledzą, i do różnych innych celów. Zrozumienie, jak działa protokół western blot, jest ważną umiejętnością dla niektórych badaczy i techników laboratoryjnych, ponieważ muszą oni być w stanie uzyskać wiarygodne i niezawodne wyniki przy użyciu tej metody. Umiejętności laboratoryjne, w tym nauczenie się, jak radzić sobie ze skomplikowanymi lub złymi próbkami oraz jak uniknąć zanieczyszczenia podczas procesu, aby wyniki testu były znane.

Ta technika jest czasami znana jako immunoblot, ponieważ zasadniczo pożądane białka są „blotowane” przeciwciałami, aby się pojawiły. Ten test może być wykorzystywany do wyszukiwania białek u wszystkich zwierząt, nie tylko u ludzi, a weterynarze często używają testu Western blot w celu ustalenia, czy stado krów zostało zainfekowane lub narażone na BSE.