Co to jest całkowita izolacja RNA?
Izolacja całkowitego kwasu rybonukleinowego (RNA) jest techniką laboratoryjną stosowaną do ekstrakcji całego komórkowego RNA z próbki tkanki. Różni się to od innych metod przetwarzania, które selektywnie wyciągają określone rodzaje RNA. Badacz może na przykład chcieć zbadać informacyjny RNA (mRNA) i może pracować z próbką, aby wyodrębnić tylko ten materiał genetyczny. Istnieje wiele protokołów laboratoryjnych dostępnych dla całkowitej izolacji RNA, z wykorzystaniem różnych produktów wykonanych przez dostawców naukowych.
Pobranie całego komórkowego RNA z próbki tkanki może mieć wiele zalet. Może dostarczyć bardziej czystych i użytecznych informacji. Ta technika może również pozwolić badaczom na sprawdzenie degradacji, która może powodować problemy z eksperymentami. Jeśli próbka jest niskiej jakości, naukowiec może ponownie wyodrębnić RNA, aby uzyskać czystszą i bardziej przydatną kolekcję RNA. Może to być ważne w przypadku wielu rodzajów badań, w których słaby RNA na początku powoduje problemy z eksperymentami w dalszej kolejności.
Techniki całkowitej izolacji RNA mogą obejmować różnorodne czynniki chemiczne. Niektórzy koncentrują się na stosowaniu nietoksycznych chemikaliów w celu zmniejszenia ryzyka uszkodzenia próbki. Takie chemikalia również ograniczają zanieczyszczenie RNA w dół i są bezpieczniejsze dla pracowników laboratoryjnych. Laboratoria zwykle wybierają konkretną substancję chemiczną i protokół, które zalecają wszystkim pracownikom, i zawierają szczegółowy opis całkowitej procedury izolacji RNA w swoich instrukcjach. Zapewnia to spójność przetwarzania RNA w zakładzie w celu uzyskania bardziej stabilnych i użytecznych wyników.
Proces rozpoczyna się od przygotowania próbki tkanki, która może różnić się rozmiarem, aby przygotować ją do leczenia, które odczynniki chemiczne pobiorą całkowity RNA. Technicy zapoznają się z instrukcją laboratoryjną, aby określić sposób obchodzenia się z próbką i leczenia jej w celu wyizolowania RNA. Mogą użyć narzędzi takich jak płytki do elektroforezy, aby sprawdzić jakość próbki, szukając oznak degradacji, które mogą wskazywać na problem z całkowitym procesem izolacji RNA.
Badacze mogą przeprowadzić własną całkowitą izolację RNA lub przekazać to zadanie asystentowi laboratorium, doktorantowi lub podobnemu pracownikowi laboratorium. Możliwe jest również zlecenie izolacji na inne urządzenia laboratoryjne. Czasami może to być konieczne w celu ochrony integralności eksperymentu, poprzez wykorzystanie strony trzeciej do generowania weryfikowalnych i powtarzalnych wyników. We wszystkich pracach naukowych opartych na badaniach z izolowanym RNA badacz musi omówić metodę zastosowaną do izolacji i kto wykonał pracę.