Como funciona o teste de endotoxina bacteriana?
O teste de endotoxina bacteriana geralmente envolve o uso de reagentes que, quando misturados em uma solução com um possível contaminante, causam uma reação, significando a presença de uma endotoxina. Os testes cromogênicos, o teste de coágulo em gel e os testes turbidimétricos são os métodos que os cientistas geralmente empregam para o teste de endotoxina bacteriana. Os técnicos usam esses métodos de avaliação em uma variedade de substâncias e objetos ao verificar a contaminação da endotoxina. Água, as matérias -primas usadas na fabricação de medicamentos, equipamentos e embalagens devem passar os padrões de endotoxina.
Bactérias, fungos e vírus têm membranas externas protetoras que consistem em lipopolissacarídeos, também chamados de LPS. A parte lipídica dessas cadeias contém endotoxinas. Essas substâncias geralmente permanecem dentro da membrana, mas são liberadas durante o processo de divisão celular e durante a destruição ou lise celular. Nos seres humanos, essas substâncias causam febre, coagulação anormal, choque séptico e outros sintesOMS, embora, diferentemente das exotoxinas dentro da célula, as endotoxinas não se convertem em um toxóide. Geralmente, os microbiologistas verificam a presença de endotoxinas associadas a várias bactérias Gram-negativas, incluindo e. coli .
O teste de coto de gel, ou o ensaio de lisado de ameboectyte (LAL) de Limulus, envolve o uso de um produto químico que destrói a membrana derivado dos amebócitos do caranguejo de Horseshoe, também referido como o canteiro de gestos de gestação. ou substância em questão. Os microbiologistas normalmente usam esse método de teste de endotoxina bacteriana em conjunto com testes cromogênicos e turbidimétricos para resultados conclusivos.
O teste de endotoxina bacteriana cromogênica usa um LAL especialmente tratado. Quando este lisado entra em contato com uma endotoxina, a reação produz uma cor específica. O processo de teste final inclui a medição da turbidez da nebulosidade da solução. Os técnicos expõem a solução formada no teste de coágulo de gel a um espectrofotômetro, que emite um feixe de luz. Ao medir a perda de intensidade da luz no feixe à medida que passa pela solução, os microbiologistas podem determinar se está presente uma endotoxina.
Os associados do LAB geralmente completam esses três testes de endotoxina bacteriana duas ou três vezes para garantir resultados precisos. O teste de gel não é usado exclusivamente, pois seu limite mais baixo de detecção é de 0,03 unidades ehrlich por mililitro (UE/ml). Os testes cromogênicos e turbidimétricos detectam endotoxinas na faixa de 0,005 UE/ml. Os parâmetros de segurança diferem muito, dependendo da substância que está sendo testada. Embora a água estéril usada para fins de injeção ou irrigação possa conter não mais de 0,25 UE/mL, a água estéril para fins de inalação pode conter até 0,5 UE/ml.