O que é o gel de poliacrilamida?
O gel de poliacrilamida é uma solução comumente usada em eletroforese, o processo de separar moléculas ou partículas de tamanhos diferentes passando-as através de um gel e aplicando corrente elétrica. Existem receitas diferentes para o gel de poliacrilamida, mas normalmente contém acrilamida, água, um tampão, persulfato de amônio (APS) e tetrametiletilenodiamina (TEMED). Este gel funciona como uma matriz que separa os compostos com base em sua carga e tamanho; quanto mais acrilamida na solução de gel, melhor separação de moléculas menores. Normalmente, este gel é usado para a separação de proteínas e DNA.
Na eletroforese, um campo elétrico faz com que as partículas carregadas se movam através de um gel, que funciona como uma peneira para fazer com que as diferentes partículas de tamanho se separem. O gel absorverá qualquer calor produzido a partir da corrente elétrica. O gel de poliacrilamida é comumente usado nesse procedimento, mas a agarose, outro produto químico que cria um gel semelhante, também pode ser usado.
Os géis podem ser feitos de concentração variável, com a quantidade de acrilamida variando de cerca de 6% a 15%. Ao misturar o gel, a acrilamida não é polimerizada, o que significa que permanece como moléculas únicas. A adição de outros produtos químicos que promovem a ligação, como o TEMED, faz com que as moléculas se liguem formando cadeias longas - a parte "poli" da poliacrilamida.
A principal vantagem do gel de poliacrilamida é que o número de ligações de ligação e dureza pode ser controlado com base na quantidade inicial de acrilamida e adição de TEMED. Um fator principal na concentração de acrilamida é o tamanho da molécula que está sendo analisada. Quanto menores os compostos sendo separados, mais acrilamida é necessária; partículas muito pequenas são separadas usando a concentração mais alta, 15%.
A acrilamida funciona controlando a quantidade de fricção no gel; a dureza do gel determina a quantidade de atrito. Compostos grandes se moverão mais lentamente pelo gel, pois naturalmente há mais atrito ou resistência devido ao seu tamanho. Compostos menores se movem mais rapidamente, pois há menos atrito. Para impedir que pequenos compostos se afastem do gel, é adicionada mais acrilamida para criar mais atrito.
O gel de DNA poliacrilamida é usado para separar cadeias de DNA de diferentes comprimentos. Pedaços de DNA separarão apenas um nucleotídeo, os compostos que compõem cada fita. Para saber quais peças se referem aos tamanhos específicos, geralmente é executado um padrão que contém fragmentos de tamanho conhecido e amostras. As peças de DNA são então comparadas com o padrão e o tamanho da fita é determinado.
Um procedimento semelhante é usado para determinar o tamanho das proteínas, na maioria das vezes no sangue. O sangue contém dois tipos principais de proteínas: globulina, uma proteína de tamanho grande, e albumina sérica, uma proteína muito pequena e com carga negativa. A separação usando gel de poliacrilamida é usada para determinar a quantidade de cada tipo.