Каковы этапы процедуры ELISA?

Процедура ELISA начинается в клинике с взятия образца крови у пациента. Затем выполняется ряд этапов с использованием тестового набора ELISA в лаборатории. Тест обнаружит присутствие антител или антигенов к заболеванию, такому как ВИЧ, в крови. Этапы включают добавление различных веществ и стирку, и результаты обычно измеряются по изменению цвета.

В качестве диагностического теста используется энзим-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA), который также называют энзиматическим иммуноанализом (EIA). Он наиболее известен как диагностический тест на ВИЧ. Тест-планшет обычно состоит из 96 небольших лунок, в которые иммобилизован определенный антиген. Если антитело присутствует в образце сыворотки, оно будет связываться с антигеном, что позволяет обнаруживать через различные этапы процедуры ELISA.

Первым шагом в процедуре ИФА является получение образца от пациента. Это делается медсестрой в стерильных условиях. Кровь обычно берется из вены на руке. Жгут накладывают на руку, чтобы набухнуть вена и облегчить процедуру, а кожа очищается там, где будет введена игла. Небольшой укол может ощущаться, когда игла входит, и кровь будет собираться в стерильную пробирку.

После взятия пробы крови ее передают в лабораторию, где остальная часть процедуры ELISA будет выполняться лаборантом. Образец крови сначала добавляют в лунки планшета ELISA. Если специфическое антитело присутствует, оно связывается с антигеном. Затем планшет промывают, используя буфер, для удаления несвязанных антител.

Затем добавляется второе антитело, обычно животного происхождения, которое имеет прикрепленный к нему фермент, который будет связываться с комплексом антитело-антиген. Пластина снова промывается, чтобы удалить избыток. Фермент реагирует на цвет при добавлении субстрата в конце процедуры ELISA. Именно измерение степени изменения цвета дает результат.

Процедуру ELISA необходимо тщательно соблюдать, чтобы избежать ложных результатов. В большинстве планшетов ELISA положительный и отрицательный контроль включен, чтобы минимизировать такие ложные результаты. При тестировании на ВИЧ положительный результат обычно сопровождается вторым подтверждающим тестом, часто другого типа, например вестерн-блоттингом.