Что такое сывороточный ИФА?

Иммуносорбентный анализ сывороточного фермента (сывороточный ИФА) - это метод, используемый для определения количества биологического вещества в образце сыворотки, основанный на специфическом взаимодействии между антигеном и антителом. Примеры биологических веществ, представляющих интерес, включают антитело, продуцируемое в ответ на вирусную инфекцию, такое как антитело против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), или гормон, который указывает на беременность, такой как хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), или аутоиммунный антитело, продуцируемое при ревматоидном артрите, таком как ревматоидный фактор. Как правило, существует прямой анализ, в котором используется специфическое антитело для выявления присутствия антигена в образце сыворотки, и косвенный анализ, в котором используется антиген для определения наличия антител в образце сыворотки.

В прямом сывороточном ELISA образец, содержащий неизвестное количество антигена, прикрепляется к неподвижной поверхности, такой как реакционная пробирка или микротитровальный планшет, и инкубируется со специфическим антителом, которое химически связано с ферментом. И наоборот, в непрямом ELISA сыворотки известный антиген прикрепляется к неподвижной поверхности и затем инкубируется с образцом сыворотки, который содержит неизвестное количество антитела. Ожидается, что антигенспецифическое антитело в образце сыворотки будет прочно связываться с иммобилизованным антигеном, тогда как неспецифические антитела удаляются на следующих этапах промывки. Обычно неподвижную поверхность обрабатывают вторым антителом, которое распознает неизменную область всех антител и которое химически связано с ферментом. Как в прямом, так и в непрямом ИФА, последний этап состоит из добавления фермент-специфического субстрата, инициирующего реакцию, которая производит измеримый сигнал, прямо пропорциональный количеству антигена или антитела, присутствующего в образце сыворотки.

Сывороточный ИФА является широко используемым тестом по нескольким причинам. Что наиболее важно, он считается надежным клиническим тестом благодаря специфичности взаимодействия антиген-антитело, и чувствительность этого анализа позволяет обнаруживать биологические вещества в чрезвычайно низких концентрациях в сыворотке крови. Он предназначен для одновременной оценки большого количества образцов и поэтому часто используется в крупномасштабных операциях, таких как скрининг образцов доноров крови на наличие антител к ВИЧ. Кроме того, наборы ELISA, которые измеряют обычно анализируемые антитела и антигены, коммерчески доступны для использования в клинических или исследовательских условиях и обычно содержат все необходимые реагенты для проведения полного эксперимента.

Растущая область исследований включает применение сывороточной технологии ELISA в области обнаружения цитокинов. Цитокины представляют собой растворимые белковые молекулы, выделяемые иммунной системой, которые часто участвуют в воспалительных процессах; Поэтому уровни цитокинов являются информативными в отношении болезненных состояний, связанных с хроническим воспалением, таких как сердечные заболевания, аутоиммунные заболевания и заболевания пищеварения. Считается, что оценка уровней цитокинов может быть в состоянии различить воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит, и в конечном итоге может быть в состоянии предсказать исход при заболевании сердца и ревматоидном артрите.