Что такое анализ убиквитинирования?

Убиквитинирование относится к связыванию белка убиквитина с другими белками тремя различными ферментами. Анализ убиквитинирования - это тест, который определяет, какая часть этого процесса происходит внутри клетки. Тесты могут использоваться для определения того, как различные условия влияют на связывание белка, этапы и структуры, которые важны на пути убиквитиннирования, и количество белка в клетке. Недостаточные или переизбыточные количества были связаны с развитием многих различных заболеваний.

Белок, обнаруженный в клетках, функция убиквитина заключается в том, чтобы связываться с белками, функционируя как «метка» или сигнал для других структур. Затем эта «метка» сигнализирует ферментам о том, что белок может быть разрушен, переработан или перемещен. Результатом является уничтожение или транспортировка белков.

Эти метящие белки важны для репарации ДНК, вирусных инфекций и иммунного ответа. Другие важные функции включают роли в клеточной гибели, клеточном делении и развитии клеток. Слишком большое количество убиквитина или его отсутствие может играть роль в формировании многих заболеваний, таких как рак, генетические нарушения и заболевания иммунной системы.

Исследователи будут использовать анализ убиквитинирования, чтобы попытаться определить, какие условия изменяют концентрацию белка в клетке и сравнивать больные клетки со здоровыми клетками. Ученые также используют это, чтобы исследовать, какие условия вызовут изменения в привязке. Кроме того, они могут попытаться связать определенный код ДНК с количеством ферментов в клетке.

Существует более одного типа анализа убиквитинирования, который специально используют ученые-исследователи. Один будет определять процент белков, которые связаны с убихинтин. Другой исследует активность ферментов или присутствие любых других промежуточных продуктов, обнаруженных в пути убиквинации. Различные анализы разработаны на основе целевого белка, с которым будет связан убиквитин.

Основой анализа убиквитинирования является включение соединения, которое помечено с использованием другого легко измеряемого химического вещества. В онкологических анализах убиквитин можно пометить криптатом, соединением, которое содержит два атома азота. Это может быть использовано для определения того, какой фермент наиболее активен в клетке.

Анализ убиквитинирования будет состоять из двух этапов. Первый - это ферментативный этап, на котором ферменты связывают меченый убиквитин с целевым белком. Вторым является этап обнаружения, на котором исследуют связывание целевого белка с использованием конъюгата, такого как антитело. Антитело флуоресцирует или меняет цвет, что позволяет исследователю определить активность ферментов.