Что такое конфокальный микроскоп?

Конфокальный микроскоп - это особый вид флуоресцентного микроскопа, используемый для получения высококачественных 2D и 3D изображений. В базовом (широкоугольном) флуоресцентном микроскопе на образец попадает свет определенной длины волны, и образец поглощает часть этого света и отражает остальную его часть на большей длине волны. Свет с большей длиной волны проходит через дихроичное зеркало, которое пропускает свет с большей длиной волны, но не исходный (более короткий) свет с длиной волны. Человек, просматривающий образец, видит только свет, прошедший через дихроичное зеркало. Базовые флуоресцентные микроскопы улавливают как сфокусированный, так и расфокусированный свет, что хорошо работает для больших образцов, где не требуется очень высокое разрешение. Это не так хорошо для просмотра мелких деталей. Конфокальный микроскоп необходим для съемки флуоресцентных изображений с высоким разрешением.

Конфокальный микроскоп использует точечное отверстие, чтобы отклонить фокусировку света. Вместо света, проходящего только через дихроичное зеркало, свет пропускается как через дихроичное зеркало, так и через крошечное отверстие, что означает, что человек, наблюдающий образец, видит только одну точку образца. Чтобы просмотреть весь образец, подвижные зеркала сканируют свет через прямоугольную плоскость образца, и компьютер собирает излучаемый свет, когда образец сканируется. Полное сканирование приведет к оптическому срезу или поперечному сечению образца. Этот тип микроскопии называется конфокальной лазерной сканирующей микроскопией, отчасти потому, что в качестве источника света используется лазер.

Чтобы создать трехмерное изображение, выполняется несколько сканирований, создавая несколько «срезов» образца, и компьютер объединяет каждый срез для создания трехмерного изображения. Микроскоп можно запрограммировать на изменение расстояния между срезами, в зависимости от того, насколько четкое трехмерное изображение хочет получить пользователь. Микроскоп также может варьировать скорость, с которой он сканирует изображение, медленное сканирование дает более высокое разрешение, чем быстрое сканирование.

Конфокальный микроскоп стал очень часто используемым оборудованием во многих научных лабораториях. Они дорогие и несколько большие, и часто имеют комнаты, предназначенные для их использования, потому что комната должна быть темной, чтобы получить хорошее флуоресцентное изображение. Хотя конфокальные микроскопы чаще всего используются для просмотра ячеек и структур внутри ячеек, они могут использоваться для получения изображения любого трехмерного флуоресцентного образца и иногда используются для просмотра полупроводниковых материалов.