Что такое конъюгат антител?

Конъюгат антитела представляет собой меченую молекулу, которую можно использовать в гистологических или ферментных анализах обнаружения антигена для локализации связанных антител. Он функционирует путем физического присоединения или конъюгирования с антителом, которое используется для маркировки интересующего антигена. Антитело, которое помечено на конъюгате антитела, представляет собой инструмент, часто используемый в исследованиях для определения либо точного местоположения, либо количества представляющих интерес белков или антигенов, против которых были получены антитело или антитела.

Гистологические и протеомные анализы часто основываются на антителах в качестве реагента в методах исследования, с помощью которых можно маркировать специфические белки. Подвергая антигену или белку интересующее антитело, которое было выращено против него, можно пометить антигены или белки. Используя конъюгат антител, то есть антитело, которое было конъюгировано с молекулой, специально используемой или синтезированной для легкого обнаружения, антитела затем могут быть идентифицированы и проанализированы. Наиболее распространенным типом конъюгата антител является флуоресцентная молекула, позволяющая идентифицировать антигены в ткани под флуоресцентным микроскопом. Другие конъюгаты включают такие молекулы, как пероксидаза хрена, которая используется в конъюгации с антителами для последующего развития с диаминобензидином (DAB).

Часто первичные антитела будут вырабатываться против специфических антигенов, тогда как вторичные антитела будут конъюгироваться с молекулами мечения и вырабатываться против первичных антител. Например, кто-то может быть заинтересован в идентификации антигена, называемого антигеном X. Затем можно использовать, например, антитело, которое вырабатывается у мыши, которое реагирует и прилипает к антигену X. Чтобы можно было найти, где были обнаружены эти первичные антитела мыши. и связанный с этими молекулами антигена X, тогда будет использоваться вторичное антитело - например, одно, выращенное в козе - которое будет помечено конъюгатом, который делает это вторичное антитело обнаруживаемым в ферментных или флуоресцентных микроскопических анализах. Для анализа локализации антигенов с использованием электронного микроскопа частицы золота часто используются в качестве конъюгата антител, поскольку их можно обнаружить с помощью электронного пучка.

Причиной использования первичных и вторичных антител вместо конъюгации антител, в которой первичное антитело напрямую конъюгировано, является экономическая эффективность. Конъюгация антител является дорогостоящей с точки зрения времени и реагентов. Специально для редких антигенов конъюгация антител на первичных антителах не стоит затрат на производство. Скорее, используя конъюгацию антител на вторичных антителах, можно сразу синтезировать большие количества конъюгированного антитела и использовать их в анализах с диапазоном первичных антител, приспособленных для локализации множества различных антигенов, что делает производственный процесс целесообразным и экономически эффективным.

В некоторых случаях, однако, первичное антитело будет помечено, чтобы уменьшить шум в сигнале обнаружения из-за повышенного неспецифического связывания антитела, которое возникает в результате использования нескольких антител. В то время как этот дорогой, высокочувствительный анализ по-прежнему будет вызывать этот метод. Можно приобрести наборы, которые позволяют исследователю пометить конъюгаты на свое собственное антитело по выбору, увеличивая стоимость реагента, но сокращая этапы протокола и, возможно, увеличивая отношение сигнал / шум в конечном анализе обнаружения антител.