Vad är ett genbibliotek?

Ett genbibliotek är termen för samlingar av deoxyribonukleinsyrafragment (DNA) som har klonats slumpmässigt från genomens genom. De är klonade som plasmider som kan replikera separat från deras kromosomer och fager, som är ett parasitvirus som livnär sig på bakterier. När klonas som plasmider är samlingen av värdceller och var och en av cellerna innehåller ett DNA -fragment. Faggenbibliotek består av vad som kallas faglysat, som är rester av förstörda celler med ett DNA -fragment insatt. När genbibliotek innehåller en samling av all genetisk information om en organisme, anses de vara ett representativt genbibliotek.

Dessutom kan bibliotek använda cellulärt rekombinant nukleinsyra (RNA) för bryggmaterial, och denna samling av värdceller med de rekombinanta vektorerna är kända som ett crNA -genbibliotek. Genbibliotekscreening hittar vissa celler som innehåller kloningvektorer med en viss gen som söks i en genlibrikARY och använder sedan en av många tekniker för att isolera och skörda dem. När de har skördats betraktas cellerna klonade. För att ha en rimlig chans att isolera och kloning av en viss gen, används vanligtvis endast representativa genbibliotek som varje gen och varje ursprungligt DNA -fragment av ett visst genom samlas in däri. För att nå 99% chans att lokalisera en viss human gen för kloning, skulle mer än 600 000 klonade celler behöva screenas för att hitta den önskade genen från ett representativt genbibliotek.

DNA extraheras från en organisme för att starta ett genbibliotek. Biblioteket är strukturerat för att organisera DNA och dess tusentals olika gener. Biblioteket blir en samling tiotusentals bakteriekolonier, var och en modulerad med ett fragment av DNA från organismen som innehåller en gen av särskilt intresse. Bibliotek innehåller också restriktionsenzymeroch en plasmid. Begränsningsenzymerna används för att läsa nukleotidinformationen för DNA och används för att skära DNA i fragment genom att separera nukleotiderna från varandra.

Samma restriktionsenzymer skär bakterieplasmiderna och fragmenten och plasmiderna kombineras i ett provrör för att kombinera, vilket gör en ny kombination. Dessa rekombinanta plasmider återförs sedan tillbaka till bakteriekulturen med antingen värmechock eller elektroporering. Dessa steg utförs om och om igen tills ett helt genbibliotek har bildats för en viss genomorganism från alla fragmenten av den ursprungliga DNA -extraktionen.