Vad är en Gram Stain?
En Gram-fläck hänvisar till ett positivt eller negativt testresultat som produceras när en jodtvätt införs i en bakteriekultur för att identifiera dess arter. Detta test, känt som Gram-färgning, fungerar genom att detektera närvaron av lipopolysackarider (lipoglykaner) och peptidoglykaner (mureiner) innehållande cellväggarna i bakterieprovet. Bakterier som har en hög nivå av peptidoglykaner sägs vara grampositiva. Däremot indikerar lägre nivåer av peptidoglykaner med lipopolysackarider att provet är Gram-negativt.
Först placeras bakterieprovet på en glasrutschbana och värms endast upp så att det blir oskadligt i termer av att vara smittsamt för hanteraren. Därefter behandlas bakterieprovet med en gentian violet-jodlösning i upp till sextio sekunder. Sliden sköljs sedan försiktigt under rent vatten och Gram-lösningen appliceras, vilket är en blandning av jod och kaliumjodid utspädd i vatten. Detta steg utlöser en reaktion på gentianfiolettföreningen.
Ursprungligen ger reaktionen en mörkblå färg. En efterföljande sköljning med etylalkohol leder dock till att färgen i vissa bakterieprover blöder ut, men inte i andra. En slutlig färglösning appliceras som använder en kontrasterande färg, vanligtvis en variation av rött. Ett prov som accepterar detta försänkning visas rosa och betecknas som Gram-negativt. Ett prov som behåller den mörkblå färgen är dock Gram-positivt.
Bortsett från identifieringsändamål ligger betydelsen av Gram-fläcktestet i det faktum att gramnegativa bakterier producerar potenta endotoxiner som kan orsaka allvarliga sjukdomar, såsom kolera och tyfus. Många gramnegativa bakterier är också resistenta mot antibiotika och det är inte möjligt att tillverka vacciner från dem. Dessutom ger inte alla bakterier ett positivt eller negativt resultat. Faktum är att vissa arter betraktas som Gram obestämd eller variabel Gram. Andra arter påverkas inte helt av testet helt enkelt på grund av att det har ett vaxliknande skyddslager i sina cellväggar som fläckarna inte kan tränga igenom.
Gram-fläcktestet utvecklades i slutet av 1800-talet av den kända danska bakteriologen Hans Christian Gram. Det ursprungliga syftet med Gram-fläcktestet var dock inte att skilja mellan olika bakteriearter alls. Faktum är att Dr. Gram bara syftade till att utforma ett bättre sätt att upptäcka förekomsten av bakterier i sputumprov som tillhandahålls av lunginflammationspatienter. Det är också intressant att notera att Dr. Grams upptäckt, även om det är oavsiktligt, skulle ha en stor inverkan på studien av antibiotikaresistenta bakterier ett halvt sekel senare.