Vad är en nordlig fläck?
Northern blot -hybridisering är en teknik som används för att detektera Messenger RNA (mRNA) -nivåer i ett prov och för att kvantifiera mängden mRNA som finns. Även om andra kraftfullare tekniker finns, förblir Northern blot standarden på grund av dess enkelhet och användarvänlighet. Northern blotting -tekniken möjliggör också direkt jämförelse av flera prover i ett enda experiment.
messenger RNA är en typ av nukleinsyra som produceras när en gen uttrycks. En gen som är påslagen och funktionell i en cell transkriberas till mRNA. MRNA transporteras sedan till cytoplasma i cellen, där det översätts till ett protein. Northern blot -analys av ett cellulärt mRNA -prov kan därför ge användbar information om utbudet av proteiner som cellen producerar.
I en norra blot extraheras mRNA från celler och körs genom en denaterande agaros gelelektroforesis, vilket gör att mRNA i provet kan separeras efter storlek. SaMples av mRNA -molekyler av kända storlekar körs samtidigt för att ge en kontroll. När elektrofores är klar överförs proverna och immobiliseras på ett fast membran, vanligtvis tillverkat av ett material som nylon. Proverna utsätts sedan för radiomärkta sonder i flera timmar före analys. Under analysen kan mRNA som har hybridiserats till en radiomärkt sond tydligt detekteras med röntgen.
Northern blotting -tekniken möjliggör observation av genuttrycksmönster mellan olika vävnadstyper. Messenger -RNA extraherat från celler från olika olika vävnader och organtyper kan jämföras, och cellulära svar på stress, infektion och många andra stimuli kan undersökas. Genom att titta på skillnader i mRNA -uttryck under olika förhållanden kan en forskare bestämma vilka typer av proteiner en cell producerar som svar på vissa stimuli. Detta kanGe ledtrådar om funktioner hos okända proteiner, eller i fallet med kända proteiner, information om cellulära svar på stimuli i fråga.
till exempel kan en nordlig fläck visa att uttrycket av ett okänt protein ökar som svar på närvaron av ett specifikt toxin. Det kan då teoretiseras att proteinet är involverat i att minska toxiciteten, kanske genom att transportera kemikalien ur cellen eller omvandla den till en metabolit. Om kända proteiner undersöks kan dokumentering av förändringar i proteinuttryck ge information om själva svaret. Om expression av en känd molekyltransportör ökades, till exempel kan det bekräftas att cellulärt svar på toxinet är att transportera toxinet ut ur cellen.