Vad är kvantitativ fluorescens?

Kvantitativ fluorescens är utställningen av strålning som släpps ut i ett prov. Med hjälp av bildteknik kan en forskare samla in information om provet och använda det för att lära sig mer om dess struktur eller funktion. Denna metod används ofta i biologi för att studera enskilda celler och hela organismer. Det kräver åtkomst till ett laboratorium som innehåller mikroskopiutrustning och kameror med lämplig känslighet. Exempel på bilder från denna analysform kan ses i läroböcker och vetenskapliga artiklar, tillsammans med diskussioner om de erhållna uppgifterna.

Prover förberedda för mikroskopavbildning kan färgas med fluorescerande taggar, som proteiner som fäster vid specifika strukturer i cellen. När dessa taggar visas via en kamera under rätt förhållanden tänds de. Att helt enkelt observera belysningen kan ge viktig information för forskaren. Till exempel kan en immunolog som letar efter spår av en specifik antikropp använda en tagg för att identifiera den. Detta är ett exempel på kvalitativ fluorescens, där belysningen ger allmän information om provets egenskaper.

Vid mätningar av kvantitativ fluorescens samlar forskaren specifik, mätbar information. Detta kan inkludera data om ljusets exakta intensitet. Ytterligare behandling av provet kan erbjuda möjligheter för avancerade avbildningstekniker som fluorescerande återhämtning efter fotoblekning (FRAP), som ger information om förflyttning av strukturer inuti prover. Alla dessa kvantitativa fluorescerande tekniker kan ge ny insikt i vad en struktur är, hur den fungerar och vad den innehåller.

Precisutrustning krävs för denna typ av arbete. Alla fluorescerande behandlingar som läggs till ett prov måste förberedas noggrant så att de taggar de önskade strukturerna och inget annat. Utrustningen måste vara lämplig känslig och kalibrerad för att bekräfta att den samlar in korrekt information. Om detektorn i en digital kamera till exempel är av kan den misslyckas med att samla upp fluorescens i vissa delar av provet, eller kan orsaka falsk avläsning. I båda fallen skulle uppgifterna vara felaktiga.

Patologilaboratorier kan använda kvantitativ fluorescens för utvärdering av vissa prov. Denna teknik används också allmänt inom forskning. Vissa mycket slående bilder kan utvecklas med hjälp av fluorescerande taggar för att separera strukturer som nerver eller specifika proteiner. Förutom att de är visuellt anmärkningsvärda kan bilderna innehålla en mängd information för forskare med förmågan att läsa dem. Det är möjligt att analysera kvantitativa fluorescensbilder med avancerade datorprogram för att extrahera mer data och generera meningsfulla resultat.