การทดสอบเอนไซม์ที่เชื่อมโยงอิมมูโนซอร์เบนท์ (ELISA) เป็นการทดสอบในห้องปฏิบัติการทางภูมิคุ้มกันวิทยาเพื่อกำหนดระดับโปรตีนในตัวอย่างทางชีวภาพ การตรวจสอบของ ELISA หมายถึงขั้นตอนสุดท้ายของการทดสอบซึ่งมีการเพิ่มสารละลายหรือสารตั้งต้นที่ชัดเจนลงในแผ่นพลาสติกที่มีแอนติบอดีที่มีเอนไซม์ล้อมด้วยเอนไซม์ เอนไซม์จะแยกสารตั้งต้นและการเปลี่ยนสีเกิดขึ้น การดูดซับแสงของสารละลายสีสุดท้ายจะถูกวัดบนเครื่องอ่านเพลท ELISA หรือเครื่องวัดการดูดกลืนแสง
มีการทดสอบ ELISA หลายประเภทโดยทั่วไปคือ ELISA ทางอ้อมและการจับหรือแซนวิช ELISA ELISA ทางอ้อมถูกใช้เพื่อตรวจจับโปรตีนที่เรียกว่าแอนติบอดีในซีรัมของผู้ป่วย ตัวอย่างของการทดสอบ ELISA ทางอ้อมคือการทดสอบไวรัสเอชไอวี (HIV) ในมนุษย์เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อเอชไอวี การทดสอบแซนวิช ELISA ตรวจจับโปรตีนหรือแอนติเจนโดยการจับระหว่างแอนติบอดีสองตัว การตรวจหาฮอร์โมน chorionic gonadotropin (hCG) ของมนุษย์ซึ่งเพิ่มขึ้นระหว่างการตั้งครรภ์ทำได้ด้วยการทดสอบ ELISA แบบแซนด์วิช
การทดสอบทั้งสองมีขั้นตอนการตรวจจับ ELISA เมื่อสิ้นสุดการทดสอบ ขั้นตอนนี้เกี่ยวข้องกับการเติมแอนติบอดี้ที่มีโมเลกุลของเอนไซม์ติดอยู่ หลังจากเติมแอนติบอดีที่มีป้ายเอนไซม์แล้วจะไม่มีการเพิ่มสารละลายสีซึ่งประกอบด้วยโมเลกุลของสารตั้งต้นสำหรับเอนไซม์นั้นเข้ามา เอนไซม์จะแยกโมเลกุลของสารตั้งต้นออกและสารละลายจะเปลี่ยนสีตามการใช้งานร่วมกัน การหาปริมาณแอนติบอดีหรือแอนติเจนในตัวอย่างผู้ป่วยทำได้โดยการวัดความเข้มของการเปลี่ยนสี
มีการรวมกันของสารตั้งต้นของเอนไซม์หลายชนิดเพื่อใช้ในขั้นตอนการตรวจสอบ ELISA เอนไซม์ที่พบมากที่สุดคือมะรุม peroxidase (HRP) ซึ่งสามารถแยกโมเลกุลสารตั้งต้น ortho-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) และ tetramethylbenzidine (TMB) หมู่คนอื่น ๆ การแตกของทั้ง OPD และ TMB ส่งผลให้มีสีเหลืองและความหนาแน่นของแสงหรือการดูดซับแสงของพื้นผิวเหล่านี้วัดโดยเครื่องอ่านเพลท ELISA การดูดกลืนแสงของ OPD นั้นวัดที่ความยาวคลื่น 490 นาโนเมตร (nm) ในขณะที่ TMB นั้นวัดที่ 450 นาโนเมตร
เอนไซม์ทั่วไปอีกตัวที่ใช้ในการตรวจสอบขั้นตอนของ ELISA คืออัลคาไลน์ฟอสฟาเทส เอนไซม์นี้ใช้กับสารตั้งต้น p-nitrophenyl phosphate (PNPP) และยังผลิตสารละลายสีเหลือง PNPP ดูดซับแสงที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร
การเลือกพื้นผิวของเอนไซม์มักจะขึ้นอยู่กับแอนติบอดีที่มีฉลากของเอนไซม์ที่มีขายในท้องตลาดเช่นเดียวกับอุปกรณ์ที่จะใช้ในการวัดการดูดกลืนแสง ชุดค่าผสมที่หลากหลายสำหรับการตรวจจับ ELISA ทำให้การทดสอบ ELISA มีความหลากหลายสูง เป็นเครื่องมือสำคัญในการทดสอบโรคและห้องปฏิบัติการวิจัย
