รอยเปื้อนแกรมหมายถึงผลการทดสอบในเชิงบวกหรือเชิงลบที่เกิดขึ้นเมื่อการล้างด้วยไอโอดีนถูกนำไปใช้กับวัฒนธรรมของแบคทีเรียเพื่อระบุสายพันธุ์ การทดสอบนี้เรียกว่าการย้อมสีกรัมทำงานโดยการตรวจสอบการปรากฏตัวของ lipopolysaccharides (lipoglycans) และ peptidoglycans (mureins) ที่มีอยู่ภายในผนังเซลล์ของตัวอย่างแบคทีเรีย แบคทีเรียที่มี peptidoglycans ในระดับสูงกล่าวกันว่าเป็นแกรมบวก ในทางตรงกันข้ามระดับ peptidoglycans ที่มี lipopolysaccharides ที่ต่ำกว่าบ่งชี้ว่ากลุ่มตัวอย่างเป็นกรัมลบ
ขั้นแรกตัวอย่างแบคทีเรียจะถูกวางไว้บนสไลด์แก้วและให้ความร้อนจนถึงจุดที่ทำให้ไม่มีอันตรายในแง่ของการติดเชื้อในเครื่องจัดการ จากนั้นตัวอย่างแบคทีเรียจะได้รับการบำบัดด้วยสารละลายไวโอเล็ตไอโอดีนที่มีความไวเป็นเวลาหกสิบวินาที จากนั้นสไลด์จะถูกล้างเบา ๆ ใต้น้ำสะอาดและใช้น้ำยาแกรมซึ่งเป็นส่วนผสมของไอโอดีนและโพแทสเซียมไอโอไดด์เจือจางในน้ำ ขั้นตอนนี้ก่อให้เกิดปฏิกิริยากับสารประกอบไวโอเล็ตเจนเทีย
ในขั้นต้นปฏิกิริยาจะให้สีสีน้ำเงินเข้ม อย่างไรก็ตามการล้างด้วยเอทิลแอลกอฮอล์ที่ตามมาจะนำไปสู่สีในตัวอย่างแบคทีเรียบางชนิดที่มีเลือดออก แต่ไม่ใช่ในสีอื่น สารละลายสีย้อมขั้นสุดท้ายถูกนำไปใช้ซึ่งใช้สีที่ตัดกันซึ่งมักจะเป็นสีแดง ตัวอย่างที่ยอมรับ Counterstain นี้จะปรากฏเป็นสีชมพูและถูกกำหนดเป็น Gram-negative อย่างไรก็ตามตัวอย่างที่ยังคงมีสีน้ำเงินเข้มอยู่นั้นก็คือแกรมบวก
นอกเหนือจากวัตถุประสงค์ในการระบุตัวตนแล้วความสำคัญของการทดสอบรอยเปื้อนแกรมนั้นอยู่ในความจริงที่ว่าแบคทีเรียแกรมลบสามารถสร้างเอนโดท็อกซินที่มีศักยภาพซึ่งอาจทำให้เกิดโรคร้ายแรงเช่นอหิวาตกโรคและไทฟอยด์ แบคทีเรียแกรมลบจำนวนมากยังทนต่อยาปฏิชีวนะและเป็นไปไม่ได้ที่จะผลิตวัคซีนจากพวกเขา นอกจากนี้แบคทีเรียบางชนิดไม่ให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวกหรือลบ ในความเป็นจริงบางชนิดถือเป็นกรัมไม่แน่นอนหรือตัวแปรแกรม สายพันธุ์อื่นไม่ได้รับผลกระทบใด ๆ จากการทดสอบเพียงอย่างเดียวเนื่องจากมีชั้นป้องกันเหมือนขี้ผึ้งในผนังเซลล์ของพวกเขาที่คราบไม่สามารถซึมเข้าไปได้
การทดสอบคราบแกรมได้รับการพัฒนาในช่วงปลายปี 1800 โดยนักแบคทีเรียชาวเดนมาร์กชื่อฮันส์คริสเตียนแกรม อย่างไรก็ตามจุดประสงค์ดั้งเดิมของการทดสอบรอยเปื้อนแกรมไม่ได้แยกความแตกต่างระหว่างเชื้อแบคทีเรียชนิดต่าง ๆ เลย ในความเป็นจริงแล้วดร. แกรมได้กำหนดวิธีการที่ดีกว่าในการตรวจสอบการปรากฏตัวของแบคทีเรียในตัวอย่างเสมหะจากผู้ป่วยโรคปอดบวม นอกจากนี้ยังเป็นที่น่าสนใจที่จะทราบว่าการค้นพบของดร. แกรมในขณะที่ไม่ได้ตั้งใจจะมีผลกระทบอย่างมากต่อการศึกษาแบคทีเรียที่ดื้อยาปฏิชีวนะในครึ่งศตวรรษต่อมา
