Blot เหนือคืออะไร

Northern blot hybridization เป็นเทคนิคที่ใช้ในการตรวจจับระดับ messenger RNA (mRNA) ในตัวอย่างและเพื่อหาปริมาณของ mRNA ที่มีอยู่ แม้ว่าเทคนิคอื่น ๆ ที่ทรงพลังกว่ามีอยู่จริงแล้ว blot ทางเหนือยังคงเป็นมาตรฐานเนื่องจากความเรียบง่ายและใช้งานง่าย เทคนิคการซับด้านเหนือยังช่วยให้สามารถเปรียบเทียบตัวอย่างหลายตัวอย่างได้โดยตรงในการทดสอบเดียว

Messenger RNA เป็นกรดนิวคลีอิกชนิดหนึ่งซึ่งเกิดขึ้นเมื่อมีการแสดงออกของยีน ยีนที่เปิดและทำงานภายในเซลล์จะถูกคัดลอกไปยัง mRNA mRNA จะถูกลำเลียงเข้าสู่ไซโตพลาสซึมของเซลล์ซึ่งจะถูกแปลเป็นโปรตีน การวิเคราะห์ blot ภาคเหนือของตัวอย่าง mRNA ของเซลล์สามารถให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์เกี่ยวกับอาร์เรย์ของโปรตีนที่เซลล์กำลังทำการผลิต

ใน blot ทางตอนเหนือ mRNA ถูกสกัดจากเซลล์และไหลผ่าน agatose gel electrophoresis ซึ่งทำให้ mRNA ในตัวอย่างถูกแยกออกตามขนาด ตัวอย่างของโมเลกุล mRNA ที่มีขนาดที่รู้จักนั้นถูกเรียกใช้ในเวลาเดียวกันเพื่อให้การควบคุม เมื่ออิเล็กโทรโฟเรซิสเสร็จสมบูรณ์ตัวอย่างจะถูกถ่ายโอนและตรึงบนเยื่อหุ้มที่เป็นของแข็งซึ่งโดยทั่วไปจะทำจากวัสดุเช่นไนลอน ตัวอย่างจะถูกสัมผัสกับโพรบ radiolabeled เป็นเวลาหลายชั่วโมงก่อนทำการวิเคราะห์ ในระหว่างการวิเคราะห์ mRNA ที่ผสมกับโพรบ radiolabeled สามารถตรวจจับได้อย่างชัดเจนโดยใช้เอ็กซเรย์

เทคนิค blotting ภาคเหนือช่วยให้การสังเกตรูปแบบการแสดงออกของยีนระหว่างประเภทเนื้อเยื่อที่แตกต่างกัน สามารถเปรียบเทียบ Messenger RNA ที่สกัดจากเซลล์ของเนื้อเยื่อและอวัยวะต่าง ๆ และสามารถตอบสนองต่อความเครียดการติดเชื้อและสิ่งเร้าอื่น ๆ อีกมากมาย โดยการดูความแตกต่างในการแสดงออกของ mRNA ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันนักวิทยาศาสตร์สามารถกำหนดชนิดของโปรตีนที่เซลล์สร้างขึ้นเพื่อตอบสนองต่อสิ่งเร้าบางอย่าง สิ่งนี้สามารถให้เบาะแสเกี่ยวกับหน้าที่ของโปรตีนที่ไม่รู้จักหรือในกรณีของโปรตีนที่รู้จักข้อมูลเกี่ยวกับการตอบสนองของเซลล์ต่อสิ่งเร้าที่เกิดขึ้น

ตัวอย่างเช่น blot ทางเหนืออาจแสดงว่าการแสดงออกของโปรตีนที่ไม่รู้จักเพิ่มขึ้นเพื่อตอบสนองต่อการปรากฏตัวของสารพิษที่เฉพาะเจาะจง มันอาจถูกทฤษฏีว่าโปรตีนมีส่วนเกี่ยวข้องในการลดความเป็นพิษโดยการขนส่งสารเคมีออกจากเซลล์หรือแปลงให้เป็นเมตาโบไลต์ หากโปรตีนที่รู้จักอยู่ในระหว่างการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโปรตีนสามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับการตอบสนองของมันเอง หากการแสดงออกของการขนส่งโมเลกุลที่รู้จักเพิ่มขึ้นตัวอย่างเช่นอาจยืนยันได้ว่าการตอบสนองของเซลล์ต่อสารพิษคือการขนส่งสารพิษออกจากเซลล์