Electrophoretic Mobility Shift Assay คืออะไร

การทดสอบคือการทดสอบที่ออกแบบมาเพื่อแยกชิ้นส่วนดั้งเดิมของเซลล์ออกเป็นส่วน ๆ ที่ระบุได้ง่าย Electrophoretic mobility shift assay เป็นการทดลองที่ใช้ไฟฟ้าเพื่อเคลื่อนย้ายโมเลกุลใหญ่เช่นโปรตีนผ่านเจลเมทริกซ์เพื่อทำให้เกิดการแยกระหว่างโมเลกุลขนาดใหญ่ที่แตกต่างกันตามขนาด เช่นเดียวกับแบตเตอรี่รถยนต์ปลายขั้วลบและขั้วบวกอยู่ด้านตรงข้ามของ electrophoretic mobility shift assay หรือ gel shift assay สิ่งนี้ทำให้กระแสไฟฟ้าดึงดูดโมเลกุลขนาดใหญ่ขึ้นอยู่กับประจุ โมเลกุลขนาดใหญ่แต่ละตัวเคลื่อนที่ในอัตราที่ต่างกันเนื่องจากขนาดที่เล็กกว่าจะได้รับการรบกวนจากเจลน้อยลง

จำเป็นต้องมีหลายขั้นตอนในการตั้งค่าการทดสอบการเลื่อนแบบอิเล็กโทรฟอเรติก โมเลกุลขนาดใหญ่ที่ต้องแยกต้องเตรียมก่อน โมเลกุลขนาดใหญ่ส่วนใหญ่ได้มาจากเซลล์ที่มีชีวิตและต้องการวิธีการเฉพาะ การได้รับชิ้นส่วนที่ต้องแยกออกมักจะต้องใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงและปฏิกิริยาทางเคมีที่ทำให้เซลล์แตกตัว เครื่องหมุนเหวี่ยงจะหมุนขวดด้วยความเร็วสูงและสร้างเม็ดของโมเลกุลขนาดใหญ่ที่ต้องการ นี่คือการละลายและมักจะมีการเพิ่มสีหรือฉลากอื่น ๆ เพื่อช่วยติดตามการเปลี่ยนเจล

เจลบางครั้งเรียกว่าเตียงจะต้องทำจากส่วนผสมที่บริสุทธิ์ของ agarose ผงและน้ำที่เปลี่ยนอย่างรวดเร็วจากของเหลวเป็นเจล โดยทั่วไปการทดสอบการเคลื่อนที่แบบอิเล็กโทรฟอเรติกจะมีหลายเลนสำหรับการตรวจแยกซึ่งใช้ในการเปรียบเทียบสารผสมโมเลกุลขนาดต่างๆ เลนเดียวถูกตั้งค่าให้เป็นตัวควบคุมเสมอและมักจะมีโมเลกุลประเภทเดียวเท่านั้น

ควรเลือกแหล่งพลังงานอย่างระมัดระวังและไม่ได้เชื่อมต่อจนกว่าทุกอย่างจะพร้อมใช้งาน ระยะเวลาที่เครื่องเปิดทำงานจะกำหนดการเคลื่อนที่แบบเคลื่อนที่ของโมเลกุลขนาดใหญ่ มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะแยกชิ้นส่วนที่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ที่เหมาะสม หากพลังงานไม่ได้รับการกำหนดเวลาอย่างเหมาะสมการเปรียบเทียบในอนาคตจะไม่ถูกต้องเช่นกัน ทิศทางของโมเลกุลขนาดใหญ่จะถูกกำหนดโดยประจุที่พวกมันมีอยู่ตามธรรมชาติซึ่งส่วนใหญ่เคลื่อนที่ไปทางด้านลบ

การทดสอบทางพันธุกรรมอย่างง่ายและการวิเคราะห์โปรตีนมักกระทำด้วยการทดสอบการเคลื่อนย้ายอิเล็กโตรโฟเรทีฟ นี่คือการแสดงที่แตกต่างกันในเลนที่แตกต่างกัน หากมีการโต้ตอบเกิดขึ้นโมเลกุลของโมเลกุลจะรวมและทำงานช้าลงผ่านเมทริกซ์เทียบกับเลนควบคุมที่มีโมเลกุลเดียวเท่านั้น การตรวจเจลกะกะนั้นใช้เพื่อกำจัดหรือยืนยันผลทางพันธุกรรมอย่างรวดเร็วว่าวิธีการที่ซับซ้อนอาจใช้เวลานานกว่าจะเสร็จสมบูรณ์ พวกเขายังสามารถระบุได้ว่าแอนติบอดีโมเลกุลของระบบภูมิคุ้มกันติดกับโปรตีนที่สามารถใช้ต่อสู้กับแบคทีเรียและไวรัสได้หรือไม่